shRNA下调MMP-9对MCAO大鼠脑保护作用的DTI研究

发布时间：2018-01-10 03:01

  本文关键词：shRNA下调MMP-9对MCAO大鼠脑保护作用的DTI研究　出处：《郑州大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：背景和目的缺血性脑损伤已经成为人类脑血管疾病的最常见类型之一,并且脑梗死后的一些常见并发症严重损害着人类的健康。其中,脑水肿做为脑梗死后的重要并发症之一,对脑梗死的发生发展起着很重要的作用。然而,基质金属蛋白酶-9(MMP-9)则与脑水肿、血脑屏障通透性紧密相关。本研究预通过对大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型脑缺血区组织的DTI成像评价,从而来探讨脑梗死后水肿区的面积及FA值与MMP-9基因表达的相关性,并进一步探讨慢病毒介导的sh RNA下调MMP-9基因的表达,减轻急性脑梗死后脑水肿的面积,从而保护大鼠的神经功能,以及改善其影像学表现。材料与方法1、将体重为260g至300g的32只健康雄性SD大鼠,随机分为以下四组(每组8只):A组(假手术组):用镊子分离颈外动脉分支,并把该分支结扎,暴露颈内颈外动脉分叉,在分叉处视野下前进0.5 cm后固定线拴,并未真正插入大鼠颈内动脉颅内段;B组(MCAO组):单笼饲养MCAO模型成功后的大鼠;C组(生理盐水组):制作MCAO模型两周前,向大鼠右侧脑室注射生理盐水5μl;D组(慢病毒干预组):制作MCAO两周前,向大鼠右侧脑室注射慢病毒介导的sh RNA 5μl。在造模成功后4h、8h、12h、18h、24h时间点,本研究的各组大鼠均进行了神经功能评分(m NSS)和磁共振扫描,采用的是美国GE Discovery MR 750 3.0T超导高场磁共振扫描机进行批量扫描,使用上海晨光公司生产的大鼠专用线圈,用棉塞固定大鼠头部使其呈仰卧位,保持头先进,扫描中心定位在大鼠视交叉,常规扫描轴位T1WI、T2WI、T2WI FLAIR、DWI、DTI等序列。计算病灶侧的ADC值和FA值。2、另取32只实验动物(每组8只),在对应于MRI检查时间点取大鼠缺血侧脑组织,Western blot测定缺血侧脑组织MMP-9蛋白表达;3、另外再取32只实验动物(每组8只),在对应于MRI检查时间点取缺血侧脑组织,行石蜡切片,进行免疫组化染色,观测MMP-9蛋白的表达;4、通过SPSS 17.0软件对本实验中的所有数据进行统计学处理,采用sx±记录计数资料。检验方法为t检验,重复测量方差分析,Pearson相关分析,检验水准为α=0.05,P0.05表示差异有统计学意义。结果1、在缺血后4h、8h、12h、18h、24h时,慢病毒干预组的m NSS评分较MCAO模型组降低,差异具有统计学意义(p0.05)2、在缺血后4h、8h、12h、18h、24h时,慢病毒干预组缺血区的ADC值、FA值较MCAO模型组升高,且差异有统计学意义。两组间的ADC值、FA值在4h、8h、12h、18h、24h时间点差异均具有统计学意义(p0.05)3、局灶性脑缺血后MMP-9蛋白表达逐渐增多;慢病毒干预组相应时间点的MMP-9蛋白的表达较MCAO模型组有所降低,且在相应的每个时间点差异均具有统计学意义(p0.05)4、各手术组大鼠的m NSS神经功能评分与缺血性脑梗死核心区的FA值、MMP-9蛋白表达存在负相关。结论1、脑梗死区脑组织MMP-9表达上调参与大鼠脑梗死周围水肿的形成以及神经功能损伤的发生。2、慢病毒介导的sh RNA通过抑制MMP-9基因的表达,减轻血管源性水肿,发挥脑梗死后的保护作用。3、磁共振DTI可以动态监测缺血性脑梗死大鼠缺血区的改变及其注射病毒进行基因抑制后变化。
[Abstract]:Background and objective: ischemic brain damage has become one of the most common human cerebrovascular disease types, and some of the common complications after cerebral infarction and serious damage to human health. Among them, as one of the major complications of cerebral edema after cerebral infarction, cerebral infarction occurrence and development plays a very important role. However, matrix metalloproteinase -9 (MMP-9) and brain edema, blood brain barrier permeability is closely related to this study. Based on the pretreatment of rats with middle cerebral artery occlusion (middle cerebral artery occlusion, MCAO) DTI imaging model of cerebral ischemia tissue evaluation, so as to explore the correlation between FA area and the area of edema and MMP-9 gene expression values after cerebral infarction. The expression of SH RNA and to further explore the lentivirus mediated downregulation of the MMP-9 gene, relieve acute brain edema after cerebral infarction area, so as to protect the nerve function of rats, and improve the imaging 琛ㄧ幇.鏉愭枡涓庢柟娉，

本文编号：1403553