小鼠脊髓水平TRPM2信号途径调节慢性炎性痛的表观遗传机制研究

发布时间：2018-02-10 13:29

  本文关键词： 慢性炎性痛 表观遗传机制 TRPM2阳离子通道 脊髓　出处：《安徽医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的探讨M型瞬时受体电位通道2(TRPM2)介导的小鼠慢性炎性痛及其表观遗传学调控机制。方法第一阶段:考察AGK2对小鼠慢性炎性痛的影响,野生型小鼠和TRPM2~(-/-)小鼠,根据AGK2的剂量(0.2μg/kg、1μg/kg、5μg/kg、25μg/kg)随机分为6大组(n=6),即:C57 CON组、C57-CFA组、C57-CFA-AGK2组;TRPM2~(-/-)CON组、TRPM2~(-/-)CFA组、TRPM2~(-/-)-CFA-AGK2组;每组再据性别不同,进一步分成2个亚组(a.雄性,b.雌性)。手术前1日测定每组小鼠的基础机械缩足阈值(MWT)、冷缩足潜伏期(CPWL)、热缩足潜伏期(PWL)、足爪肿胀度,手术后3~9日连续鞘内注射相应剂量的AGK2,每日2次,注射时间为早晚八点,同时在手术后1,3,5,7,9日测定各组小鼠的行为学。第二阶段:考察SAHA对小鼠慢性炎性痛的影响,将野生型(C57)小鼠和TRPM2~(-/-)小鼠,按随机对照原则分为6组:C57对照组(C57 CON组)、C57炎性痛组(C57 CFA组)、C57炎性痛+辛二酰苯胺异羟肟酸组(C57 SAHA组)、TRPM2~(-/-)对照组(TRPM2~(-/-)CON组)、TRPM2~(-/-)炎性痛组(TRPM2~(-/-)CFA组)、TRPM2~(-/-)炎性痛+辛二酰苯胺异羟肟酸组(TRPM2~(-/-)SAHA组),每组6只。采用完全弗氏佐剂(CFA)40μl于小鼠左后肢足底皮下注射建立慢性炎性痛模型,SAHA处理组于造模后3~9 d行为学测试后鞘内注射50 mg/kg的SAHA,其它4组注射等量生理盐水。分别测定小鼠的机械刺激伤害感受阈、辐射热刺激伤害感受阈、冷痛阈及足爪肿胀度。第三阶段:荧光定量PCR分析SIRTs基因的差异性表达,免疫荧光双标和激光共聚焦法检测SIRT2/TRPM2蛋白的共表达情况,蛋白印迹法(western bloting)分析各组小鼠SIRT2下游信号途径CREB蛋白的表达。结果第一阶段实验结果:疼痛行为学:CFA诱导的慢性炎性痛C57小鼠造模后,与对照组比较,PWL、CPWL、MWT及足爪肿胀度均呈显著下降(P0.001),给予AGK2治疗后,小鼠疼痛行为的改善与AGK2的给药浓度呈显著的正相关;TRPM2~(-/-)小鼠在未造模前表现出正常的疼痛行为学反应,与C57小鼠没有统计学差异(P0.05),造模后3 d,其PWL、CPWL、MWT及足爪肿胀度略低于TRPM2~(-/-)CON组,但仍显著高于C57 CFA组(P0.001),给予AGK2注射后,小鼠的疼痛行为学也有明显改善。第二阶段实验结果:C57 CFA组的机械刺激伤害感受阈值和热刺激伤害感受阈值均明显低C57 CON组(P0.001),C57 SAHA组在给予SAHA干预后,各种疼痛阈值显著升高,与C57 CFA组比较有统计学差异(P0.001);TRPM2~(-/-)CFA组机械刺激伤害感受阈值和热刺激伤害感受阈值均明显高于C57 CFA组,与TRPM2~(-/-)SAHA组比较差异无统计学意义(P0.05)。C57 CFA组足爪肿胀度造模后明显升高,与C57 CON组、C57 SAHA组比较均有显著差异(P0.001);TRPM2~(-/-)CFA组足爪肿胀度明显低于C57 CFA组(P0.001),与TRPM2~(-/-)SAHA相比,差异无统计学意义(P0.05)。第三阶段实验结果:造模后,C57小鼠SIRT1,2,4,6,7 mRNA的表达均明显上升,而SIRT3和SIRT5的mRNA的表达是下降的;在免疫荧光定位分析中,C57 CFA组与TRPM2~(-/-)CFA组的SIRT2的蛋白表达没有显著差异,但是TRPM2~(-/-)CFA组TRPM2与C57 CFA组比较几乎没有表达。结论TRPM2参与小鼠慢性炎性痛的调节,组蛋白去乙酰化酶抑制剂可以通过对TRPM2的表观遗传调控改善小鼠的痛行为。
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本文编号：1500628