细胞穿膜肽Tat-FynP靶向抑制炎性痛大鼠NR2B磷酸化的实验研究

发布时间：2018-04-27 03:23

本文选题：炎性疼痛 + NR2B　；参考：《南方医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：研究背景炎性疼痛是慢性疼痛产生的重要原因之一,人群患病率高,仍缺乏有效的治疗手段。研究表明,中枢敏化是慢性炎性疼痛发生发展的重要机制之一,其中脊髓背角 N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)是介导炎性疼痛的关键分子,其通过亚基NR2B磷酸化过程介导中枢敏化,抑制NR2B磷酸化可以很好地缓解炎性疼痛症状,是治疗慢性炎性疼痛的重要靶点。因NR2B参与多种生物过程,其抑制剂可产生多种不良反应和副作用,限制了临床应用,进一步寻找抑制NR2B磷酸化的药物和方法就成为目前研究的重点。研究表明,脊髓背角酪氨酸激酶FynSH2结构域与突触后致密物蛋白95(Postsynaptic density,PSD-95)PDZ3结构域的结合是促进NR2B的磷酸化,介导慢性炎性疼痛发生发展的关键。本课题组前期研究表明,通过多肽阵列技术明确了 Fyn与PSD-95结合的短肽序列FynP,并利用蛋白结构转导域技术合成穿膜肽Tat-FynP,经离体实验证明Tat-FynP可竞争性抑制大鼠脊髓背角(Spinal cord dorsal horn,SCDH)原代神经元Fyn与PSD-95的结合。本研究在前期基础上,进一步在体检测鞘内注射Tat-FynP是否可以竞争性抑制炎性痛大鼠SCDH Fyn与PSD-95结合、降低NR2B磷酸化水平从而缓解炎性痛痛觉过敏行为,为临床治疗慢性炎性疼痛提供治疗依据。研究方法鞘内给予大鼠组氨酸标记的多肽药物,免疫组化检测大鼠脊髓背角神经元并对组氨酸阳性神经元进行计数评分,明确多肽药物穿膜效率;免疫印迹检测大鼠足底注射完全弗氏佐剂(Complete Freund's adjuvant,CFA)致脊髓背角NR2B磷酸化水平的时量变化趋势;鞘内注射Tat-FynP(突变序列Tat-mFynP作为对照),免疫共沉淀检测Tat-FynP对Fyn与PSD-95相互作用的影响;炎性痛大鼠鞘内给予不同剂量的Tat-FynP,免疫印迹检测Tat-FynP对NR2B磷酸化水平的影响,同时检测Tat-FynP对CFA炎性痛大鼠机械性刺激缩足反应阈值(Mechanical paw withdrawal threshold,MWT)及热刺激缩足潜伏期(Thermal paw withdrawal latency,TWL)等疼痛行为影响,进一步观察大鼠放置反射、抓握反射、翻正反射,以判断大鼠有无运动功能障碍。研究结果与FynP组相比,Tat-FynP组及Tat-mFynP组大鼠脊髓背角组氨酸阳性神经元评分明显增高(P0.01),而空白组与FynP组大鼠脊髓背角组氨酸阳性神经元评分无明显差异(P0.05),表明具有Tat穿膜结构的Tat-FynP及Tat-mFynP可有效穿过细胞膜进入神经元内;与空白组大鼠比较,CFA可显著刺激脊髓背角的NR2B(p-NR2B)磷酸化表达(P0.01),CFA注射后24h达高峰,可至少维持14天;与对照组Tat-mFynP比较,Tat-FynP竞争性抑制Fyn与PSD-95的结合,剂量依赖性降低大鼠脊髓背角的p-NR2B水平(P0.01),缓解CFA引起的MWT及TWL痛觉过敏(P0.01),各组大鼠未出现运动功能障碍。研究结论:基于多肽阵列技术合成的靶向抑制脊髓背角Fyn与PSD-95相互作用的穿膜肽Tat-FynP可有效穿膜并进入大鼠脊髓背角神经元,靶向抑制Fyn与PSD-95的结合,降低p-NR2B水平,缓解CFA炎性痛行为,为治疗慢性炎性疼痛提供治疗依据。
[Abstract]:In this study , it has been shown that the combination of Fyn and PSD - 95 in rat spinal dorsal horn plays an important role in the development of chronic inflammatory pain . Compared with control group , Fyn and PSD - 95 could effectively penetrate the membrane and enter the dorsal horn neurons of rat spinal cord .

【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R402

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