乌司他丁对脓毒症大鼠内皮细胞保护机制的研究

发布时间：2017-03-15 23:01

  本文关键词：乌司他丁对脓毒症大鼠内皮细胞保护机制的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的观察乌司他丁(ulinastatin, UTI)对脓毒症大鼠的治疗作用,并通过血清内皮细胞活化标记物分子以及炎性细胞因子的动态变化,探索乌司他丁对脓毒症大鼠内皮细胞的保护作用及其可能的作用机制。方法采用腹腔注射(intra-peritoneal injection)脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)法制备脓毒症大鼠模型。52只健康雄性SD (Sprague-Dawley, SD)大鼠,体重约(250±35)克,随机分为生理盐水预处理组(control group, CTL, n=26),乌司他丁预处理组(UTI, n=26)。两组均腹腔注射脂多糖(LPS) 10mg/Kg制备脓毒症大鼠模型,UTI组于LPS注射前18h、3h腹腔注射UTI100kU/kg(溶于5m1生理盐水中)预处理,CTL组给予腹腔注射5m1生理盐水预处理。分别于制模后0.5h、2h、4h、12h、24h、72h取下腔静脉血,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清炎症因子如肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor, TNF-a)、白细胞介素(Interleukin, IL-6、IL-10)和内皮细胞活化标记物如选择素E-selection、细胞间粘附分子(Intercellular adhesion molecule, ICAM-1)、血管细胞粘附分子(Vascular cell adhesion molecule, VCAM-1)、血管内皮细胞生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF)、促血管生成素(Angiopo ietins, Ang-1),检测大鼠肺灌洗液总蛋白含量,取心脏、肺、肾脏器官制作病理切片,观察各脏器病理改变情况。结果1.一般情况：制模后两组大鼠一般情况类似,均有竖毛、进食减少、疲倦、腹泻、眼周分泌物增多等表现,但UTI组较CTL组动物灵活,活动度增加(有觅食行为)等。2.炎症因子：制模后两组脓毒症大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-10均逐渐升高,分别于24 h、 12 h、 12h达到峰值。与CTL组相比,UTI组各时间点TNF-α、IL-6均明显降低(24 h TNF-α(ng/L):119.8±28.9比190.2±30.4,12 h IL-6 (ng/L):327.8±26.9比948.7±63.8,p0.05或p0.01),IL-10明显升高(12hIL-10(pg/ml):80.7±1.9比42.3±4.9,p0.01)。3.内皮细胞活化标记物：制模后两组脓毒症大鼠血清ICAM-1、VCAM-1、E-selection、VEGF、Ang-1均逐渐升高,分别于72h、72 h、12h、12h、12h达到峰值。与CTL组相比,UTI组各时间点ICAM-1、VCAM-1、E-selection、VEGF均明显降低(72h ICAM-1 (ng/L):115.6±11.6比129.4±8.2,72 h VCAM-1 (ng/L):36.3±3.2比68.8±2.4,12h E-selection (ng/L):89.3±1.8比120.1±2.7,12h VEGF (pg/ml):123.7±15.9比143.5±13.9,p0.05或p0.01), Ang-1明显升高(12h Ang-1 (pg/ml):315.6±19.5比221.2±11.8,p0.05)。4.肺灌洗液总蛋白浓度：制模后两组脓毒症大鼠肺灌洗液总蛋白浓度均逐渐升高,于12h达到峰值,之后至造模后72h逐渐下降但仍高于正常水平(p0.05)。与对照组相比,UTI组各时间点肺灌洗液总蛋白浓度明显降低(12h总蛋白浓度：(μg/ml)608.8±33.9比805.6±27.5,p0.01)。结论乌司他丁可以通过降低血管通透性,改善微循环状态,抑制炎症因子和内皮细胞活化分子的异常表达,抑制炎症过度反应以及抑制内皮细胞过度激活,从而达到保护内皮细胞的作用。
【关键词】：乌司他丁 脓毒症 内皮细胞 炎症因子 大鼠
【学位授予单位】：浙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R459.7
【目录】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-10
• 一 实验材料与方法10-15
• (一) 实验动物10
• (二) 实验药品与试剂10
• (三) 实验仪器与器材10
• (四) 实验方法10-15
• 1. 动物分组10-11
• 2. 脓毒症模型制备11
• 3. 观察和检测指标11-15
• 3.1. 一般情况11
• 3.2. 细胞因子检测11
• 3.3. 肺泡灌洗液总蛋白测定11-12
• 3.4. HE染色病理学观察12-13
• 3.5. 免疫组化法检测心肌组织ICAM-1蛋白的表达13-14
• 3.6. 统计学处理14-15
• 二 实验结果15-20
• (一) 两组大鼠的一般情况15
• (二) 两组大鼠各时间点细胞因子比较15-17
• 1. 两组大鼠炎症因子比较15
• 2. 两组大鼠内皮活化标记物比较15-17
• (三) 两组大鼠TNF-α与粘附分子ICAM-1、VCAM-1的相关性分析17
• (四) 两组大鼠病理学观察17-19
• 1. 两组大鼠肺脏、肾脏、心脏的HE染色17-18
• 2. 免疫组织化学法18-19
• (五) 肺泡灌洗液总蛋白浓度19-20
• 三 分析与讨论20-25
• 1. 乌司他丁对VEGF的影响20-21
• 2. 乌司他丁对Ang的影响21-22
• 3. 乌司他丁对粘附分子的影响22-23
• 4. 乌司他丁对炎症因子的影响23-25
• 四 结论25-26
• 参考文献26-29
• 附图29-32
• 致谢32-33
• 文献综述33-37
• 参考文献36-37

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