缺氧条件下核呼吸因子-1对大鼠心肌细胞线粒体功能的影响

发布时间：2017-03-16 06:00

  本文关键词：缺氧条件下核呼吸因子-1对大鼠心肌细胞线粒体功能的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:为了研究NRF-1基因对大鼠心肌细胞(H9c2)线粒体功能代谢的影响,我们建立1%O2+5%CO2的物理缺氧模型,观察NRF-1基因能否改善大鼠心肌细胞在缺氧条件下的生长状态及能量代谢水平,旨在为心力衰竭的基因治疗提供一种新的途径。方法:1.利用第三代慢病毒质粒系统构建NRF-1过表达细胞株(pCDH-NRF)、干扰细胞株(sh-NRF)和空病毒细胞株(pCDH-vector)。Western blot法及荧光定量PCR法鉴定NRF-1的表达水平。2.分别在5%CO2+95%空气及1%O2+5%CO2条件下培养三组细胞24h及48h,使用CCK-8法测定三组细胞在缺氧状态下细胞活力的变化。3.分别在5%CO2+95%空气及1%O2+5%CO2条件下培养三组细胞48h,使用流式细胞术测定线粒体膜电位的变化。4.使用细胞线粒体能量代谢仪检测各组细胞在正常和缺氧条件下线粒体的耗氧水平。结果:1.成功构建出NRF-1基因过表达慢病毒载体,并且荧光定量PCR结果显示,过表达细胞株中NRF-1基因表达水平(4.08±0.3)高于空病毒组细胞株(1.00±0.15),而干扰组细胞株中NRF-1基因表达水平(0.35±0.14)低于空病毒组细胞株(1.00±0.15);Western Blot结果显示,过表达细胞株中NRF-1蛋白表达水平(5.07±0.63)高于空病毒组细胞株(3.15±0.59)与干扰组细胞株(1.66±0.22)。2.在正常条件下培养细胞24h后,NRF-1过表达细胞株、干扰组细胞株及空病毒组细胞株OD值分别为1.4365±0.0223、1.5125±0.0543、1.4087±0.0263;而在1%O2+5%CO2条件下培养细胞24h后,三组细胞株细胞OD值分别为1.4605±0.0413、1.4833±0.1092、1.4365±0.0926,差异变化不明显。3.在正常条件下培养细胞48h后,NRF-1过表达细胞株、干扰组细胞株及空病毒组细胞株OD值分别为1.8649±0.0132、1.8176±.03964、1.7872±0.0062;而在1%O2+5CO2条件下培养细胞48h后,三组细胞株细胞OD值分别为1.5706±0.0251、1.0781±0.0717、1.4038±0.0375,差异变化显著,具有统计学意义(p0.05)。4.正常条件下NRF-1过表达组细胞,NRF-1干扰组细胞和空病毒组细胞的线粒体膜电位去极化水平分别为3.1%、5.1%、1.2%,而在1%O2+5%CO2缺氧培养细胞后,NRF-1过表达组细胞,NRF-1干扰组细胞和空病毒组细胞线粒体膜电位去极化水平分别为52.7%、28.1%、48.1%,提示NRF-1基因过表达可以降低缺氧对线粒体膜电位的损伤。5.细胞在氯化钴及缺氧处理后,与空病毒组细胞株相比,NRF-1过表达组细胞株的基础氧耗水平较高,NRF-1干扰组细胞株的基础氧耗水平较低。结论:NRF-1基因的过表达可以降低细胞在缺氧条件下的进一步损伤,其可能机制为过表达NRF-1基因可以通过减少细胞在缺氧条件下线粒体膜电位的降低,增强细胞氧耗,从而达到保护细胞免受缺氧的影响。初步证实NRF-1基因可以作为治疗心力衰竭的候选分子。
【关键词】：核呼吸因子-1 缺氧 大鼠心肌细胞H9c2 氧耗
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R541.6;R450
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 中英文缩略词9-12
• 前言12-15
• 实验材料及方法15-30
• 结果30-42
• 讨论42-48
• 结论48-49
• 参考文献49-54
• 综述54-63
• 参考文献59-63
• 致谢63-64
• 读学位期间发表的学术论文64-65
• 个人简历65

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