MiR-365对非小细胞肺癌细胞放射敏感性的影响及其机制研究

发布时间：2020-03-18 01:22

【摘要】：在非小细胞肺癌(NSCLC)的临床治疗过程中,放射治疗是一种重要的辅助治疗手段,但由于治疗过程中NSCLC耐辐射性的存在,严重影响了 NSCLC病人的治疗疗效和预后情况。因此,寻找到一个新颖有效的放疗增敏剂是目前亟需解决的问题。研究表明,microRNAs(miRNAs)参与了包括辐射增敏在内的许多生物进程。本研究发现,miR-365可以通过调控CDC25A来调节NSCLC细胞的放射敏感性,且miR-365的表达水平与NSCLC细胞的放射敏感性呈正相关。通过MTT和克隆形成实验我们发现,与对照组相比,转染miR-365能够使辐射抵抗的NSCLC细胞A549的放射敏感性明显增加,而转染anti-miR-365则能够使辐射敏感的NSCLC细胞H460的放射敏感性显著降低。为了探讨miR-365提高NSCLC辐射敏感性的机制,我们初步筛选出了 miR-365的下游靶基因CDC25A。报告基因、RT-PCR和Western blot实验结果显示,miR-365可以通过靶向CDC25A的3'UTR来调节其mRNA和蛋白表达水平。此外,我们通过MTT、EdU和克隆形成实验发现,miR-365能够通过下调CDC25A的表达水平进而增强NSCLC细胞A549和H1299的放射敏感性。同时,在体内裸鼠成瘤实验的研究中,我们得出与体外实验一致的结果,即miR-365能够对NSCLC细胞产生显著的辐射增敏作用。综上所述,miR-365能够通过靶向CDC25A进而发挥对NSCLC细胞的辐射增敏作用。本研究结果为miR-365在NSCLC放射治疗中的功能和潜在机制提供了新的见解,同时表明miR-365在NSCLC临床放疗实践中具有可观的应用潜力。目的探讨用siRNA敲降乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)的表达对宫颈癌ME-180细胞的增殖能力及放射敏感性的影响。方法根据不同的处理方法,分别按两种分组方式进行分组。(1)把宫颈癌ME-180细胞分为4组:空白对照组、4Gyγ射线照射组、HBXIP-siRNA转染组以及HBXIP-siRNA++y射线照射联合组。采用MTT和克隆形成实验法来检测细胞增殖;采用qRT-PCR检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bid的表达;Western blot检测蛋白激酶AKT的磷酸化水平。(2)把宫颈癌ME-180细胞分为3组:空白对照组、HBXIP-siRNA单独处理组、HBXIP-siRNA和AKT共转染组。对3组细胞进行不同剂量的γ射线照射,并采用克隆形成实验方法检测细胞生长。采用Studentt-test对数据进行统计学分析,P0.05表示差异有统计学意义。结果MTT实验和克隆形成实验结果显示,与γ射线照射组相比,HBXIP-siRNA转染+γ射线照射联合组的宫颈癌ME-180细胞增殖率明显降低(t=11.63、12.17,均P0.01),并伴随抑凋亡蛋白Bcl-2表达的降低(t=10.88,P0.01)和促凋亡蛋白Bid表达的增高(t=9.31,P0.01)。γ射线照射明显上调了 HBXIP蛋白的表达水平和AKT蛋白的磷酸化水平,而转染HBXIP-siRNA则抑制了γ射线照射导致的AKT磷酸化水平的升高。另外,与HBXIP-siRNA单独处理组相比,HBXIP-siRNA和AKT共转染组中HBXIP-siRNA对宫颈癌ME-180细胞增殖的影响显著降低(t=8.96,P0.01)。结论降低HBXIP蛋白表达可以抑制辐照诱导的AKT磷酸化水平,进而降低宫颈癌ME-180细胞的增殖能力,同时增强其放射敏感性。
【图文】：

４邋Ｇｙ和８邋Ｇｙ邋ｙ射线照射均会使Ａ５４９细胞中ｍｉＲ－３６５的表达水平显著下逡逑调；但相比空白处理组，４邋Ｇｙ邋丫射线照射和８邋Ｇｙ邋Ｙ射线照射对Ｈ４６０细胞中ｍｉＲ－３６５逡逑表达水平无显著影响（图１－２Ａ，Ｂ）。逡逑２１逡逑

８邋Ｇｙ的丫射线照射。克隆形成实验结果表明，与空白处理组相比，转染ｍｉＲ－３６５能逡逑够显著增强Ａ５４９细胞的放射敏感性，而转染ａｎｔｉ－ｍｉＲ－３６５则能够显著降低Ｈ４６０逡逑细胞的放射敏感性。（图１－３邋Ａ，Ｂ）逡逑Ａ逦Ｒ逡逑＾邋ｔ邋－逦Ａ５４９逦°逦．逦Ｈ４６０逡逑Ｉ邋0．0，，逦Ｘｓ｝邋＾邋００１－逦Ｖｌ逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ逦＿§逦－ａ－Ｃｏｎｔｒｏｌ逦＼逦：逡逑Ｉ逦＋—－３６５逦、逦｜逦—ａｎｔｉ－ｍｉＲ－３６５逦、」逡逑Ｚ邋０邋００１４逦０逦１逦２逦＇逦４逦＇逦８逦＇邋Ｚ邋０邋００１邋＇逦０逦＇逦２逦＇逦４逦＇逦８逦＇逡逑ＩＲ邋（Ｇｙ）逦ＩＲ邋（Ｇｙ）逡逑图１－３邋ＭｉＲ－３６５表达水平与非小细胞肺癌细胞系放射敏感性呈正相关逡逑克降形成实验检测ｍｉＲ－３６５或ａｎｔｉ－ｍｉＲ－３６５对肺癌Ａ５４９邋（Ａ）或Ｈ４６０邋（Ｂ）细胞放射敏感逡逑性的影响。与免ｆｔ处埋组相比，转染ｍｉＲ－３６５能使Ａ５４９细胞的放射敏感性显著增强，而转染逡逑ａｎｔｉ－ｍｉＲ－３６５则能使Ｈ４６０细胞的放射敏感性显著降低。每组实验重复３次。＊＊，邋Ｐ＜０．０１；邋？检逡逑验。逡逑另外，对Ａ５４９细胞进行４种处理：空白处理、转染ｍｉＲ－３６５、４邋Ｇｙ邋丫射线照射、逡逑转染ｍｉＲ－３６５联合４邋Ｇｙ邋Ｙ射线照射。ＭＴＴ实验结果表明，与空白处理相比，虽然单逡逑独的ｍｉＲ－３６５转染或丫射线（４邋Ｇｙ）照射都抑制了邋Ａ５４９细胞的生长，但生长程度无逡逑统计学差异。而ｍｉＲ－３６５与ｙ射线照射联合能够明显抑制肺癌细胞Ａ５４９生长
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R734.2;R730.55

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本文编号：2587992