海带多糖调节P38MAPK通路保护放射诱导损伤的下颌下腺血管

发布时间：2020-03-19 23:01

【摘要】：目的:探讨海带多糖(LJP)通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路改善放射诱导的小鼠下颌下腺血管损伤。方法:1、将120只2月龄雌性昆明小鼠,随机分为对照组、LJP组、放射组、放射+LJP组,每组30只,用~(60)Coγ射线制作放射诱导小鼠下颌下腺损伤模型。LJP腹腔注射于放射前1d进行,连续给药7d后,改为每2d一次,放射后14d结束。2、分别于放射后1d,7d,14d,检测各组小鼠体重,检测毛果芸香碱在30 min内诱导的唾液总量,并称重每只小鼠下颌下腺重量。3、采用HE染色观察放射后1d,7d,14d小鼠下颌下腺腺泡、导管、血管和组织间质的形态学变化。4、采用免疫组织化学法观察放射后1d,7d,14d小鼠下颌下腺CD31,p-p38MAPK,Bcl-2的表达。5、采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测放射后1d,7d,14d VEGFA,VEGFR-2的表达。6、采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定下颌下腺组织中p-p38MAPK和内皮素-1(ET-1)水平。结果:1、不同时间点各组小鼠体重变化:放射组和放射+LJP组小鼠体重明显减小(P0.05),与放射组相比,放射+LJP组体重增加(P0.05),LJP组和对照组未见差异(P0.05)。2、放射后1d,7d,14d各组小鼠的唾液量:不同时间点放射组和放射+LJP组小鼠唾液量均明显减少(P0.05),经LJP防治后,与放射组相比,放射+LJP组小鼠唾液量呈增加趋势(P0.05),LJP组和对照组未见差异(P0.05)。3、各组小鼠下颌下腺重量无明显差异(P0.05)。4、HE染色显示:与对照组相比,LJP组小鼠下颌下腺形态无明显异常变化。对照组毛细血管丰富,可见大量红细胞,与对照组相比,放射组和放射+LJP组毛细血管少,低倍镜下见较小的腺泡细胞,高倍镜下可见少量红细胞。放射组和放射+LJP组腺泡呈空泡样变性,经LJP治疗后随着时间的延长,放射+LJP组毛细血管量增多。5、放射后1d,7d,14d放射组和放射+LJP组小鼠p-p38MAPK的表达增强(P0.05),在放射后1d达峰值,随着时间的延长放射+LJP组P38MAPK的表达有减少趋势,在放射后14d恢复到对照组水平。放射组和放射+LJP组小鼠ET-1的表达增加(P0.05),经LJP防治后,在不同时间点放射+LJP组ET-1表达量有减少趋势,LJP组和对照组未见差异(P0.05)。6、放射后1d,7d,14d放射组和放射+LJP组小鼠CD31,Bcl-2表达减弱(P0.05),经LJP防治后,在不同时间点放射+LJP组CD31,Bcl-2表达量有增加趋势,LJP组和对照组未见差异(P0.05)。结论:1、放射诱导的下颌下腺血管损伤与放射诱导p38MAPK磷酸化有关,下颌下腺血管损伤导致小鼠唾液流速降低。2、LJP可下调磷酸化p38MAPK从而下调ET-1保护放射诱导的下颌下腺血管损伤,继而升高小鼠唾液流速。3、LJP可以上调VEGFA,VEGFR-2表达,下调磷酸化p38MAPK表达,改善放射诱导的下颌下腺血管损伤。
【图文】：

小鼠颌下腺,棉球,棉垫,小鼠

放射+LJP 组每只小鼠均用 15Gy 单剂量照射，，对照组及对照+LJP 组小鼠照射剂量为 0Gy。图2-2 放射诱导的小鼠颌下腺损伤模型Fig.2-2 The model of radiation-induced submandibular gland injury of mice2.3 称重不同时间点各组小鼠体重，检测毛果芸香碱诱导的唾液流速并称重颌下腺2.3.1 分别于放射后1d,7d,14d 称重各组小鼠体重。2.3.2 将无菌脱脂棉制成数个绿豆大小的小棉球和数个棉垫（3cm *5cm），为每只测唾小鼠准备两个棉球和一块棉垫，称量记录棉球和棉垫干重。用3.5%水合氯醛（350 mg/kg）麻醉小鼠，经颈部皮下注射毛果芸香碱（2mg/kg），将小棉球放入小鼠舌下，随时更换称重，以便收集到所有唾液，共计 30 min 。（图2-3）唾液分泌量（mg）= 棉球和棉垫总湿重 - 棉球和棉垫总干重。按照 1mg / μl ，计算唾液体积, 按照收集时间（分钟）和分泌唾液量（μl）计算唾液流

下颌下腺,小鼠,电子分析天平

半下颌下腺组织放入备好的小瓶子，封口、标记，固定时间 8h-24h。固定好后用滤纸吸干唾液腺上多余液体，在电子分析天平上称重下颌下腺。图2-3-3 小鼠下颌下腺Fig.2-3-3 submandibular gland of mice
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R782;R730.55

【参考文献】