CGA衍生多肽CHR对脓毒症时血脑屏障通透性影响及其机制研究

发布时间：2020-03-30 11:53

【摘要】：目的:探讨嗜铬粒蛋白A衍生多肽CGA47-66(即CHR,Chromofungin)对LPS所诱导的永生化人脑微血管内皮细胞高通透性的影响及其相关分子机制。方法:(1)分别用不同浓度的LPS(0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、50μg/ml)刺激HBMEC细胞,用CCK8法检测细胞活力变化并筛选出LPS最佳处理浓度;(2)分别用LPS、CHR、CGA4-16作用于人脑微血管内皮细胞,Western blot法检测不同时间点紧密连接蛋白的表达情况,筛选出最佳作用的时间点;(3)分别用LPS、CHR、CGA4-16作用于人脑微血管内皮细胞,Transwell小室法及EVOM法检测内皮细胞相对通透性;Western blot及RT-PCR法检测紧密连接蛋白(ZO-1和Claudin-5)的表达情况。结果:(1)与空白组相比,随着LPS浓度增加HBMEC细胞的活性受到显著抑制(均P0.05);当LPS浓度为5μg/ml时,细胞抑制率约为50%。(2)随着LPS作用时间延长,其细胞内紧密连接相关蛋白ZO-1、Claudin-5的表达逐渐下调,6h后蛋白表达量降到最低(均P0.05),12h和24h后其蛋白表达与6h相比无明显差异。(3)LPS作用下HBMEC单层细胞电阻值明显降低(t=-18.214,P0.001),细胞通透性显著升高(t=6.083,P=0.004),ZO-1、Claudin-5的蛋白和mRNA表达明显下调(均P0.05),而CHR可显著改善上述变化(均P0.05)。结论:嗜铬粒蛋白A衍生多肽CHR能够改善LPS所致的脑微血管内皮细胞高通透性,其机制可能与其紧密连接相关蛋白的表达上调有关。
【图文】：

图１邋ＣＣＫ８法检测细胞活性逡逑

１脑微血管内皮细胞形态逡逑脑微血管内皮细胞在显微镜下呈梭形或椭圆形，细胞胞膜透亮，边界清晰，逡逑胞核清晰可见（图１）。逡逑图１邋ＨＢＭＥＣ细胞形态（ｌ0ｘｌ0倍）逡逑Ｆｉｇ．邋１邋Ｔｈｅ邋ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ邋ｏｆ邋ＨＢＭＥＣ邋ｃｅｌｌ邋（１０ｘ１０）逡逑２邋ＬＰＳ对ＨＢＭＥＣ细胞活性的影响逡逑ＬＰＳ对于ＨＢＭＥＣ细胞的活性具有一定的浓度依赖性。随着ＬＰＳ浓度（０．０１、逡逑０．０５、０．１、０．５、１、５、１０、５0ｎｇ／ｍｌ）的增加，细胞抑制率逐渐上升（０．２１６±０．０５０，逡逑０．２４７±０．０３１，０．２６７±０．０６３，邋０．３０２±０．０５７，邋０．３９８士０．０３２，邋０．５０８±０．０４４，邋０．５９２±０．０４３，逡逑０．７７２±０．０５０）。当ＬＰＳ为５ｎｇ／ｍｌ时，细胞的生长抑制率约为５０％；当ＬＰＳ浓度为逡逑Ｏ．Ｏｌｊｘｇ／ｍｌ时，细胞抑制率最低，约为２１．６％；当ＬＰＳ为５０ｐｇ／ｍｌ时，细胞的生长逡逑抑制率达最高，约为７７．２％邋（见图２）。逡逑１７逡逑
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R459.7

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本文编号：2607510