利用液相芯片技术检测儿童急性呼吸道感染及感染性腹泻病原体的研究

发布时间：2020-03-30 15:29

【摘要】：研究背景与目的据世界卫生组织报道,每年大约有300万5岁以下儿童因为患有急性呼吸道感染或者腹泻病而死亡。其中急性呼吸道感染是世界范围内引起人类发病甚至死亡的最常见的一种急性传染病,近年来频频爆发新型急性呼吸道传染病。另一方面,腹泻病是全球范围内五岁以下儿童的第二大死因。快速、准确检测呼吸道和感染性腹泻病原体是疾病诊治与预控的关键。本研究利用液相芯片技术对儿童的急性呼吸道感染以及感染性腹泻病原体进行检测,为重大传染病原体核酸快速应急检测平台的建立提供实验依据。研究方法(1)采集广东省第二人民医院的儿童呼吸道咽拭子临床样品74份,肠道腹泻粪便临床样品96份,对样品进行预处理后,采用核酸提取试剂盒提取样品的核酸;(2)采用Luminex液相芯片试剂盒对提取的74份咽拭子标本核酸、96份粪便标本核酸分别进行检测;(3)引用荧光定量qPCR法分别74份咽拭子标本核酸、96份粪便标本核酸进行检测;(4)对检测结果不一致标本的多重PCR产物进行克隆并测序、BLAST分析。结果(1)74例儿童咽拭子标本经液相芯片和qPCR方法检测,阳性检出率分别为77.0%与68.9%,混合感染的阳性检出率分别为33.8%、25.6%。共检出8种病毒包括肠道病毒、鼻病毒、人博卡病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、冠状病毒以及H1N1病毒。其中人博卡病毒检出率最高,其次是肠道病毒与鼻病毒;分别对两种方法对每一种病毒的检出进行统计学比较,液相芯片对人博卡病毒、肠道病毒、鼻病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、H1N1病毒检出率与qPCR方法比较的差异均有统计学意义。两种方法的一致率为79.72%。总体而言,液相芯片对儿童咽拭子标本的阳性检出率、混合感染的阳性检出率、每一种病毒检出率高于qPCR。(2)96例儿童粪便标本经过Luminex液相芯片和qPCR方法检测后,阳性检出率分别为65.63%和64.58%,混合感染的阳性检出率分别为26.04%、24.0%。主要检出7种病原微生物,分别为:肠道腺病毒、诺如病毒、轮状病毒A、空肠弯曲杆菌、大肠杆菌、产肠毒素型大肠杆菌和沙门氏菌。其中沙门氏菌的检出率最高,其次是空肠弯曲杆菌、A组轮状病毒、诺如病毒。分别对两种方法检出的每一种肠道病原体进行统计学比较,液相芯片对沙门氏菌、空肠弯曲杆菌、A组轮状病毒以及诺如病毒检出率与qPCR方法比较的差异均有统计学意义。两种方法的一致率为91.67%。总体而言,液相芯片对儿童粪便标本的阳性检出率、混合感染的阳性检出率与qPCR方法相当。但液相芯片对于每一种粪便病原体检出率更高。(3)对两种方法检测不一致的15例儿童咽拭子临床标本和13例儿童粪便临床标本的多重PCR产物进行克隆并测序鉴定,测序结果与qPCR的检测结果基本一致。结论(1)液相芯片技术可以较准确地检测呼吸道和肠道粪便的病原体,与qPCR相比具有所需高通量、检出率高、所需样品量少以及实验操作相对简单等优势,可用于呼吸道和肠道病原体的快速应急检测。(2)液相芯片技术一次实验可平行检测十余种病原体,尤其适合混合感染病原体的检测。
【图文】：

呼吸道病毒,液相,检出,情况

的结果与荧光定量ｑＰＣＲ的检测结果进行配对计数资料的ｘ２检验进行统计分析。逡逑以荧光定量ｑＰＣＲ的检测结果为参考，计算两种方法的敏感度、特异性、阳性预逡逑测值和阴性预测值，以Ｐ＜0．0５为差异有统计学意义。逡逑２．３结果逡逑２．邋３．１邋Ｌｕｍｉｎｅｘ液相芯片检测呼吸道病毒检出情况逡逑利用ｘＴＡＧ？ＲＶＰＦＡＳＴｖ２试剂盒的液相芯片方法对７４例儿童咽拭子临床样逡逑本进行呼吸道病原体的核酸检测，结果显示５７份样本病毒阳性，阳性检出率为逡逑７７．０％。人博卡病毒检出率最高为６４．９％邋（４８／７４），，其次是肠道病毒与鼻病毒均逡逑为２９．７％邋（２２／７４），腺病毒为８．１％邋（６／７４），呼吸道合胞病毒与Ｈ１Ｎ１均为６．８％逡逑（５／７４），副流感病毒与冠状病毒均为１．４％邋（１／７４），没有检出乙型流感病毒和逡逑人偏肺病毒（见图２－１）。其中只感染一种呼吸道病毒的阳性率为４３．２％（３２／７４），逡逑混合感染的阳性率为３３．８％邋（２５／７４），混合感染是指患儿受到２种或２种以上逡逑的病毒共同感染，混合感染检测结果见表２－１１。逡逑

混合感染,液相,粪便,肠道病毒

逦第三章利用液相芯片技术检n,儿童感染性腹泻病原体逦逡逑其中只感染一种肠道病毒或细菌的阳性率为３９．５８％邋（３８／９６），混合感染的阳性逡逑率为２６．０４°／。（２５／９６），混合感染是指患儿受到２种或２种以上的肠道病毒或（和）逡逑细菌共同感染，混合感染检测结果见表３－１２。逡逑
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R725.6;R440

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