荧光层析法肾功能损伤标志物Cys C、ALB无创检测技术方法的建立

发布时间：2020-03-31 02:50

【摘要】：背景:肾脏具有较强的代偿能力,损伤早期并没有明显的临床症状,经常被人们所忽略,当出现明显症状时往往已处于中晚期,这对肾功能损伤患者的及时治疗及有效预后带来很大影响~([1,2])。由此,肾功能损伤的早期筛查诊断就显得尤为重要。尿白蛋白和胱抑素C是肾功能损伤早期筛查及辅助诊断的重要指标,且研究表明二者联合检测可提高肾损伤检测灵敏度~([3,4])。目前,临床上针对胱抑素C和白蛋白检测主要以免疫比浊法为主,此方法主要适于拥有相对完善检验设备的大中型医院,不适于基层或社区医院的床旁快速检测,限制了其临床应用。荧光免疫层析技术不仅满足床旁快速检测的需求,且具有灵敏度高、操作简便等优点;此技术可弥补国内胱抑素C、白蛋白检测方法的缺憾,对患者早期肾损伤的发现具有重要临床价值。目的:通过对荧光免疫层析工艺进行优化,建立一种快速、定量检测肾损伤标志物胱抑素C、白蛋白的新型方法,为荧光免疫层析法应用于该类疾病的临床检测奠定基础。方法:1.参考品制备:使用样品稀释液分别稀释胱抑素C、白蛋白抗原,制备胱抑素C、白蛋白室内参考品。2.尿液胱抑素C荧光免疫层析试纸条的研制:使用荧光微球标记胱抑素C抗体;羊抗鼠IgG作为质控线C线,配对胱抑素C抗体作为检测线T线,包被在同一NC膜上;利用双抗体夹心原理和荧光免疫层析原理制备试纸条。3.尿液白蛋白荧光免疫层析试纸条的研制:使用荧光微球标记白蛋白抗体;羊抗鼠IgG作为质控线C线,配对白蛋白抗体作为检测线T线,包被在同一NC膜上;利用双抗体夹心原理和荧光免疫层析原理制备试纸条。4.试纸条工艺研究及性能评价:分别对试纸条制备过程中主要原材料及工艺进行筛选优化,并对其性能进行评价。结果:1.制备了一套胱抑素C室内参考品和一套白蛋白室内参考品。2.建立了定量检测尿液胱抑素C的荧光免疫层析快速检测方法。胱抑素C检测线性范围为0.05-5 mg/L;最低检出限为0.03 mg/L;试纸条的批内变异系数(CV)均小于10%,批间变异系数均小于15%。试纸条的回收率在85%-115%之间。采用本研究制备的试纸条检测免疫比浊法检测过的50份样本,结果显示两种方法具有较好的相关性(R~2为0.9674)。3.建立了定量检测尿液白蛋白的荧光免疫层析快速检测方法。白蛋白检测线性范围为5-200 mg/L;最低检出限为2.5 mg/L;试纸条的批内变异系数均小于10%,批间均小于15%。试纸条的回收率在85%-115%之间。采用本研究制备的试纸条检测免疫比浊法检测过的50份样本,结果显示两种方法具有较好的相关性(R~2为0.9796)。结论:建立了一种快速、定量检测人尿液中胱抑素C和白蛋白含量的荧光免疫层析方法,为荧光免疫层析法应用于肾功能损伤早期的临床检测奠定基础。
【图文】：

示意图,荧光免疫,试纸条,层析

斩切机将结合垫裁剪为宽 8 mm、长 20 mm；以 50 μL/cm 进行喷涂处理，，放置于 37℃恒温干燥箱的荧光微球-抗体复合物均匀喷涂在处理后的结合置于 37℃恒温干燥箱中 2h，干燥后密封在铝箔袋备用。品垫的制备切机将样品垫裁剪为宽 19 mm、长 20 mm；垫处理液（含 1%BSA、0.5%吐温-20 的 PBS 缓冲液），放置于 37℃恒温干燥箱中 2h 后，将制备好的样品。纸条的组装条组装示意图 3.1。依次将样品垫、结合垫、硝酸纤 PVC 底板上[78]，组装完成后使用裁条机将其切割成卡壳，将其密封在含有干燥剂的铝箔袋中，放置 4℃

示意图,试纸条,判断标准,示意图

图 3.2 试纸条的判断标准示意图1.失效或取样失败 2.阴性 3.阳性免疫层析试纸条实验材料研究的选择垫原料为玻璃纤维膜，其承载着的玻璃纤维膜质地及孔径对荧光垫吸附能力过强，可能会影响样球复合物的大量聚集，最终影响BRC-875、HBRC-855、HBRC-8纸条制备工艺进行胱抑素 C 荧光样三组试纸条，反应 10 min 后，膜。膜的选择
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R446.6;R692

【相似文献】