小鼠三种病毒核酸检测方法的优化及与血清学检测结果的对比分析

发布时间：2020-04-04 19:50

【摘要】：实验动物是生命科学研究的重要工具,其自身的质量,特别是微生物质量非常重要,因而需要对实验动物的微生物质量进行监测。目前,实验动物排查病毒多采用血清学方法对动物的既往感染情况进行回顾性排查,然而对于动物当期病毒感染情况以及周围环境的病毒存在状态需要进行病原学检测。基于核酸扩增的病原检测技术具备高敏感性和特异性,可应用于实验动物病原检测。但在实验动物样品前处理环节,样品储运条件对核酸检测的影响未见报道。目前国内在实验小鼠病毒检测中核酸检测技术应用较少,该方法在实验小鼠健康监测的适用性有待探讨。因此,本论文研究了小鼠样品储运条件对三种病毒核酸检测的影响,并应用核酸检测方法对我检测实验室的送检样品开展了病毒核酸检测方法的适用性研究。首先,本论文研究了样品储存温度和不同类型保存剂对于三种病毒核酸检出的影响。在室温(25℃)和低温(4℃)条件下,分别以生理盐水和BufferAVL作保存剂保存样品,用荧光定量PCR对样品的小鼠肝炎病毒(MHV)、呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo-3)及小鼠诺如病毒(MNV)核酸检出量进行检测。结果显示BufferAVL组样品病毒核酸降解幅度最小,4℃保存的样品病毒核酸检出量下降幅度低于室温组;以Buffer AVL为保存剂,4℃保存的样品在3天时的病毒核酸检出量的下降幅度在50%以下。因此以Buffer AVL作保存剂进行低温运输可有效保护病毒核酸。然后,本论文对小鼠样品的核酸检测与血清学检测进行了比较。在随机选取的272份小鼠盲肠内容物样品和对应的小鼠血清样品中,MHV、Reo-3和MNV三种肠道病毒检出率分别为17.3%、18.8%、16.9%;而血清学抗体阳性率分别为1.2%、1.2%、14.8%。MHV、Reo-3、MNV三种病毒的核酸检测结果与血清学检测结果不完全一致。在实验小鼠病原监测中核酸检测方法作为病原学检测方法可与血清学方法互补。本论文还对新技术NASBA-ELISA进行了探索。以SV、Reo-3、MHV三种病毒RNA为模板进行NASBA扩增,NASBA扩增产物经电泳分析,条带单一清晰;但未能通过ELISA方法实现产物信号放大。该方法在实验室应用中需要进一步优化。
【图文】：

检出量,病毒核酸,室温保存

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【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R446.1;R440

【参考文献】