姜黄素对大鼠脓毒症心肌损伤的保护作用及对HMGB1的影响研究

发布时间：2020-04-10 16:38

【摘要】：背景:脓毒症(sepsis)是一个重要的公众健康问题,起病凶险,病死率高,可引起全身重要器官功能障碍,而脓毒症心肌损伤(SIMD)是脓毒症常见的并发症,发生率高达40%,心功能障碍又会加剧脓毒症病情,影响脓毒症的预后。参与脓毒症心肌功能障碍有许多机制,包括氧化应激、细菌毒素、细胞凋亡、细胞因子、线粒体损伤等。姜黄素具有抗氧化、抗炎、抗凋亡、清除自由基等多方面的作用,这与对抗脓毒症心肌损伤的发病机制存在诸多吻合之处。高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一种高度保守的DNA结合蛋白,HMGB1的功能取决于其分子定位,生理情况下HMGB1存在于细胞核内,具有稳定核小体的结构和促进基因重组、修复、转录等,有“DNA伴侣”之称,脓毒症时HMGB1释放至细胞外,是一种重要的晚期炎症因子。有研究表明姜黄素可下调HMGB1的受体,显著减少HMGB1向细胞质转移、释放和表达。目的本课题通过动物实验探索姜黄素治疗脓毒症心肌损伤作用及对HMGB1的影响研究,为治疗脓毒症心肌损伤提供新的策略。方法:30只雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham)、脓毒症组(CLP)、干预组(Cur),每组均为10只。Sham组仅翻动肠腔,不结盲肠;CLP组采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症大鼠模型;Cur组大鼠造模后按100mg/kg计量予以腹腔注射姜黄素处理,各组大鼠分别于建模后6h、24h麻醉后取血及心脏组织。检测血清中CK、CK-MB水平,光镜下观察大鼠心肌组织病理改变,使用Elisa及PCR技术检测不同部位HMGB1的表达。此次实验的数据使用了SPSS18.0软件包统计处理,计量数据采取均数±标准差(x±s)的表达方式。经验证符合正态分布的数据,选取独立样本T检验对两样本均数间进行比较,多组均数间比较,采用了方差齐性检验合并One-way ANOVA(单因素方差分析)的方法,若不符合正态分布及方差齐性检验,则采用秩和检验方法。p0.05差异有统计学意义。结果:1、CLP组大鼠出现一般状态改变,Cur组大鼠较CLP组症状减轻。2、各组大鼠心肌组织光镜观察:CLP组与Sham组比较,心肌纤维断裂、间质水肿,心肌细胞坏死,细胞间隙变大,毛细血管充血,大量炎症细胞浸润,24h组较6h组病变严重。Cur组大鼠心肌细胞上述改变较CLP组明显减轻。与脓毒症6h组相比,脓毒症24h组心肌病理积分更大(p0.01),差异有统计学意义;与假手术6h、24h组相比,脓毒症6h、24h组心肌病理积分均更高,分别为(p0.01)、(p0.01),差异均有统计学意义;与脓毒症6h组相比,姜黄素组6h心肌病理积分减小(p0.01),差异有统计学意义;与脓毒症24h组相比,姜黄素24h组心肌病理积分减少(p=0.033),差异有统计学意义。3、各组CK-MB及CK的比较:与假手术6h组比较,脓毒症6h组CK-MB水平均显著升高(p0.01),差异有统计学意义,而姜黄素6h组CK-MB水平比脓毒症6h组水平降低(p0.01),差异有统计学意义;随时间延长,24h各组血清CK-MB浓度均较6h组降低,与假手术24h组比较,脓毒症24h组CK-MB水平均显著升高(p=0.001),差异有统计学意义,而姜黄素24h组CK-MB水平比脓毒症24h组水平降低(p=0.046),差异有统计学意义。血清CK变化结果与CK-MB比较一致。结果显示姜黄素对脓毒症心肌损伤有明显的保护作用。4、各组血浆HMGB1水平的比较:与假手术6h组比较,脓毒症6h组血浆HMGB1水平明显升高(p0.01),差异有统计学意义;与脓毒症6h组比较,姜黄素6h组血浆HMGB1水平下降(p=0.005),差异有统计学意义,而脓毒症24h组的HMGB1水平升高(p=0.079),差异无统计学意义;与假手术24h比较,脓毒症24h组HMGB1水平升高(p=0.078),差异无统计学意义;姜黄素24h组与脓毒症24h组比,HMGB1水平明显下降(p=0.033),差异有统计学意义。5、各组心肌HMGB1基因水平的比较:与假手术6h组比较,脓毒症6h组大鼠心肌组织中HMGB1 m RNA表达水平降低(p=0.037),差异有统计学意义;与脓毒症6h组比较,姜黄素6h组治疗后表达水平有所升高(p=0.438),差异无统计学意义;与假手术24h组比较,脓毒症24h组大鼠心肌组织HMGB1 m RNA表达水平升高(p=0.334),差异无统计学意义,与脓毒症24h组比较,姜黄素24h治疗后表达水平降低(p=0.208),差异无统计学意义。与脓毒症6h组比较,脓毒症24h组HMGB1 m RNA表达水平升高(p=0.438),差异无统计学意义。结论:姜黄素对CLP造模大鼠急性心肌损伤有保护作用,可作为一种治疗脓毒症及保护心肌组织的有效药物;姜黄素可降低胞外HMGB1水平,但对基因水平无调节作用,可能通过影响HMGB1释放及移位而发挥抗炎作用。
【图文】：

2.2.2 制作大鼠 CLP 模型腹腔注射 10%水合氯醛溶液（3mg/kg）麻醉大鼠后仰卧剃毛器剔除腹部正中线皮毛，碘酊擦拭消毒 3 遍，范围约中线切口 2cm，依次打开皮肤和腹膜，暴露腹腔脏器，用镊盲肠末端至根部 1/3 位置处用 0-2 号线结扎盲肠，50mL 注一次，避免伤及肠系膜血管，将盲肠回纳至腹腔，依次缝术后皮下注射 0.9%生理盐水 3mL 抗休克。将各组大鼠放回食进水。观察每组大鼠生存情况，每 6 小时记录一次。

第 3 章 结果3.1 基本情况及生存率比较假手术组大鼠反应灵敏，皮毛光滑，呼吸平稳。脓毒症组大鼠 6 小时至24 小时活力明显下降，，出现精神萎靡、嗜睡、呼吸急促、竖毛，眼角出现脓性分泌物。姜黄素治疗组大鼠精神反应较脓毒症组改善。3.2 光镜观察各组大鼠心肌组织形态
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R459.7

【参考文献】

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1 尹海燕;邱敏珊;何丹;张锐;陶s

本文编号：2622461