利奈唑胺非敏感肠球菌临床危险因素分析及耐药机制研究

发布时间：2020-04-22 11:26

【摘要】：背景:利奈唑胺是一种新型恶唑烷酮类抗生素,常用来治疗多重耐药的革兰阳性菌感染。美国和中国分别在2000年和2007年引入使用,它被认为是治疗VRE、MRSA和青霉素耐药的肺炎链球菌引起感染的有效药剂。近年来,利奈唑胺耐药的葡萄球菌和肠球菌在多个国家出现,给临床治疗带来了挑战。方法:对北京协和医院2015-2017年间75份病历(包括15例LNSE患者病例和60例LSE的患者病例)及2012-2017年分离出16株LNSE(14株粪肠球菌、1株屎肠球菌和1株铅黄肠球菌)和56株LSE进行分析。对前者运用卡方检验及T检验分析临床资料的差异性。后者在准确鉴定菌株的基础上,检测15种抗菌药物的最小抑菌浓度。对纳入菌株进行分子分型,进而进行聚类及同源性分析。在耐药机制方面对耐药相关基因及毒力基因进行PCR扩增测序。对4株临床分离粪肠球菌进行利奈唑胺诱导耐药实验并检测23S rRNA编码基因位点突变情况。对14株临床分离的LREfs进行接合实验,分析耐药基因在菌株间的传递情况。结果:在LNSE和LSE两组中年龄、住院天数、侵入性操作、患者基础情况、利奈唑胺的使用等因素无统计学差异。分离的16株LNSE多来自妇科(25%,4/16)和外科(25%,4/16)。标本类型主要为尿液(4/16)、引流液(4/16)和血液(2/16)。大部分菌株利奈唑胺MIC为8μg/ml,氯霉素非敏感率为100%,此外耐药率较高的有四环素、氯霉素、左氧氟沙星和红霉素,分别为100%、94.8%、62.5%和62.5%。万古霉素、替考拉宁、氨苄西林、替加环素、呋喃妥因、达托霉素都有较高的敏感性,分别为93.8%、93.8%、87.5%、100%、93.8%和 100%。optrA、fexA、erm 基因仅在耐药菌中为阳性,阳性率分别为100%、100%和35.7%。PFGE对菌株同源性分析具有更高的分辨率,以80%相似度为标准时与MLST有较好的一致性。临床分离的LRE中只有两株检测出G2237A位突变,其他突变未见。cfr阴性,核糖体蛋白L3和L4氨基酸水平也没有改变,optrA基因均为阳性,其蛋白具有5种不同型别,分别为OptrAE349、KD、RDK、EDM和D。诱导耐药试验说明optrA基因阴性的菌株在长时间药物诱导后主要出现G2576T突变,也存在C2610T突变,optrA基因阳性的菌株则未见G2576T突变,出现的突变为G2237A和G2504A。optrA基因定位在细菌的质粒上,接合成功率为 50%(7/14)。结论:本研究中利奈唑胺使用史不是耐药产生的危险因素,利奈唑胺非敏感肠球菌的耐药机制有点突变和optrA,optrA为主要耐药机制且可在不同菌株之间传播。
【图文】：

科室,重症监护室,算数平均

胶块置于ＥＢ染液（４００ｍｌ水＋４0ｎｌ邋ＥＢ储存液）中，染色３０ｍｉｎ，蒸馏水清洗３０ｍｉｎ。逡逑电泳图像用ＢＩＯ－ＲＡＤ的ＧＥＬ邋ＤＯＣ２０００成像系统及Ｑｕａｎｔｉｔｙ邋Ｏｎｅ软件获取。逡逑２）菌株进化树的绘制逡逑经限制性内切酶Ｓｍａ邋Ｉ酶切的ＰＦＧＥ图谱用ＢｉｏＮｕｍｅｒｉｃｓ数据库软件进行处逡逑理，用Ｌａｍｂｄａ邋ＰＦＧ邋Ｌａｄｄｅｒ进行标准化校准，聚类图使用非加权配对算数平均法逡逑（ＵＰＧＭＡ）构建，差异容许度为１．５。逡逑３．结果逡逑３．１科室及标本类型分布逡逑分离的实验菌株中２５％来自妇科（４／１６），２５％来自外科（４／１６），其他分逡逑别来自内科、急诊科、皮肤科、神经科、儿科、重症监护室等，标本类型主要逡逑为尿液（２５％，邋４／１６）、引流液（２５％，４／１６）和血液（１２．５％，２／１６）。逡逑

树图,最小生成树

逦０．４９４逡逑３．４邋ＭＬＳＴ邋及邋ＰＦＧＥ邋分析逡逑最小生成树ＭＳＴ（Ｍｉｎｉｍｕｍｓｐａｎｎｉｎｇｔｒｅｅ）（图４）显示了邋１４株利奈挫胺耐药逡逑的粪肠球菌和５６株利奈挫胺敏感的肠球菌之间的克隆关系，每一个圆圈代表一逡逑个ＳＴ型，圆圈大小代表该种ＳＴ型的菌株数量，连线表示之间相差的等位基因逡逑个数，粗实线、细实线、虚线和点线分别代表了两种ＳＴ型之间有６个以上、５逡逑个、４个和小于４个等位基因相同。连线的长度代表了两个ＳＴ型之间的亲缘关逡逑系远近。图５中的耐药株ＭＬＳＴ树图更好地显示了等位基因的差异，不同ＳＴ型逡逑相差４个以上等位基因。１４株利奈唑胺耐药肠球菌中５株ＳＴ１６，，３株ＳＴ４８０，逡逑２邋株邋ＳＴ５８５，其他分别为邋ＳＴ８６０，ＳＴ３６３，ＳＴ２４９，邋ＳＴ７７２。图邋６邋的邋ＰＦＧＥ邋聚类分逡逑析中以８０％相似度为标准时，，分为６个克隆群，与ＭＬＳＴ有较好的一致性，命逡逑名为克隆群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R446.5

【参考文献】