庄河地区幽门螺杆菌抗生素耐药影响因素分析及耐药相关基因的筛选鉴定

发布时间：2020-05-09 22:48

【摘要】：目的:本文拟探讨庄河地区幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)抗生素耐药情况并分析可能的影响因素,检测H.pylori主要耐药相关基因的突变情况,进一步筛选鉴定与耐药有关的基因改变。本研究将揭示庄河地区H.pylori抗生素耐药情况及相关基因突变特征,为探讨H.pylori耐药相关分子机制提供线索和理论依据。研究方法:1、收集1998-2017年间庄河地区受检者胃镜活检胃粘膜标本454例,体外原代培养H.pylori100株。2、采用E-test法检测H.pylori对甲硝唑、克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林、四环素的敏感性。3、利用酚-氯仿法抽提H.pylori全基因组DNA,聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)对H.pylori毒力因子cagA、vacA(s1、s2、m1a、m1b、m2、i1、i2)、iceA1、iceA2、babA2、oipA、slyD、hrgA以及cagA-EPIYA基序进行分型检测。4、利用PCR扩增及DNA测序分别检测H.pylori耐药相关基因23SrRNA V,gyrA,gyrB,rdxA,frxA的突变情况,利用生物信息学软件预测突变前后基因结构的变化,筛选鉴定与耐药有关的基因改变。5、统计分析软件采用SPSS 18.0,二元logistic回归分析年龄、性别、年代、疾病、毒力因子和H.pylori抗生素耐药的关系。MIC值的比较采用Mann Whitney U或t检验,P0.05认为差别有统计学意义。结果:1、100株H.pylori,甲硝唑、左氧氟沙星、克拉霉素、阿莫西林、四环素的耐药率分别是78.0%、56.0%、31.0%、9.0%、15.0%,双重、三重、四重、五重耐药率分别是23%、20%、6%、4%;2、H.pylori对甲硝唑、克拉霉素、四环素的耐药率在1998-1999,2002-2004,2016-2017三个年代无明显统计学差异,趋于稳定。左氧氟沙星、阿莫西林的耐药率呈上升趋势(OR:2.089,95%CI:1.142-3.821,P=0.017;OR:5.035,95%CI:1.327-19.105,P=0.018);男性受检者对克拉霉素耐药率和多重耐药率显著高于女性受检者(44.4%(24/54)vs 15.2%(7/46),P=0.002;68.5%(37/54)vs 34.8%(16/46),P0.001);抗生素的耐药率与宿主胃疾病状态无关;在抗生素耐药与毒力因子携带之间的关系方面,甲硝唑的耐药率在vacAs1m1/m2组低于vacAs1m1m2组(65%vs 85.7%,P=0.026);cagA~+对左氧氟沙星的耐药率高于cagA~-组(60.9%vs 23.1%,P=0.020)。slyD~-对左氧氟沙星的耐药率高于slyD~+组(68.5%vs 41.4%,P=0.006);对于克拉霉素,iceA~(++)的耐药率低于iceA~(-+)(19.7%vs 52.4%,P=0.017);阿莫西林的耐药率iceA~(++)组低于iceA~(--)(1.6%vs 27.8%,P=0.009);3、在克拉霉素耐药株中,74.2%(n=23)23SrRNA V区发生A2143G位点突变,经软件分析位点C1883T、C2131T、T2179G突变前后基因结构存在改变;在左氧氟沙星耐药菌株中,28.6%(n=16)和12.5%(n=7)发生GyrA的87(N to K/I)和91(D to N/Y/G)位点突变,其中在91位点突变株中发现一株伴有D99N的突变,另外,在一株耐药菌株中发现D143E突变,经软件分析这些位点突变前后结构存在改变;甲硝唑耐药相关RdxA突变类型包括蛋白翻译截短(n=26,33.3%),移码突变(n=8,10.3%),与黄素单核苷酸辅因子结合的位点突变(n=16,20.5%)及其它等(n=11,14.1%),预测分析发现前三类和最后一类的A118S突变前后存在结构改变。结论:1、庄河地区H.pylori抗生素耐药情况以甲硝唑、左氧氟沙星、克拉霉素耐药为主,双重及多重耐药率较高;2、庄河地区H.pylori抗生素耐药年代变化趋势:甲硝唑、克拉霉素、四环素在三个年代趋于平稳,而左氧氟沙星、阿莫西林呈上升趋势;抗生素耐药影响因素主要包括性别和毒力因子cagA、vacA、slyD、iceA;3、H.pylori对克拉霉素的耐药主要以23SrRNA的A2143G突变为主,新发位点C1883T、C2131T、T2179G和耐药有关;H.pylori对左氧氟沙星耐药主要以gyrA的87、91位点氨基酸改变为主,新发位点D99N和D143E和耐药有关;H.pylori对甲硝唑耐药与rdxA的蛋白截短、框移、FMN结合有关,新发位点A118S和耐药有关。
【图文】：

抗生素耐药,抗生素,情况,方法

我们采用 E-test 方法检测了 100 株 H.pylori 对五种抗生素的耐药情况（图1）。结果发现，H.pylori 对 MNZ、LVX、CAM、AMX、TCN 五种抗生素总的耐

模式图,耐药,抗生素耐药,模式图

LVX 9CAM 3AMX 0TCN 1双重耐药 23MNZ+LVX 17MNZ+CAM 5LVX+CAM 1三重耐药 20MNZ+LVX+CAM 11MNZ+LVX+TCN 6MNZ+LVX+AMX 2MNZ+CAM+AMX 1四重耐药 6MNZ+LVX+CAM+AMX 2MNZ+LVX+CAM+TCN 4全耐药 4
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R446.5

【参考文献】