白念珠菌SAP2、ERG11与唑类药物耐药关系的研究

发布时间：2020-05-12 13:48

【摘要】：目的:1、检测白念珠菌唑类药物耐药菌株和敏感菌株Sap2的活性,明确白念珠菌耐药株和敏感株Sap2活性差异。2、建立人工菌血症模型,探究白念珠菌唑类药物耐药菌株和敏感菌株的毒力及致病性差异。3、检测白念珠菌唑类药物耐药菌株和敏感耐药菌株SAP2、ERG11的mRNA表达水平,探究其与白念珠菌耐唑类药物的关系。方法:1、采用微量肉汤稀释法M27-A4进行药物敏感性试验,获得实验用白念珠菌菌株。分别选取对氟康唑、伊曲康唑及伏立康唑交叉耐药,对氟康唑、伊曲康唑、和伏立康唑单一耐药,对氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑均敏感的白念珠菌菌株各10株,用BSA培养基检测这50株白念珠菌的Sap2活性,并作统计学分析。2、将清洁级昆明小鼠60只(约8周龄,雌雄各30只,体重[28±2]g),随机分为6个组(氟康唑耐药组、伊曲康唑耐药组、伏立康唑耐药组、交叉耐药组、敏感组和空白对照组),将实验用白念珠菌菌悬液分别注入实验小鼠的尾静脉,建立人工菌血症模型。记录小鼠死亡情况(30天),计算小鼠的死亡率和生存率,做统计分析。3、实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测SAP2、ERG11的mRNA相对表达量,分析其表达水平与唑类药物耐药的关系。结果:1、Sap活性检测结果:氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑交叉耐药菌株(10株),氟康唑耐药菌株(10株),伊曲康唑耐药菌株(10株),伏立康唑耐药菌株(10株),三者均敏感菌(10株),共50株白念珠菌均有透明环产生。氟康唑耐药组,Pz值=0.631±0.010;伊曲康唑耐药组,Pz值=0.701±0.028;伏立康唑耐药组Pz值=0.623±0.011;交叉耐药组,Pz值=0.590±0.023;敏感组,Pz值=0.795±0.016;交叉耐药组与其他菌株组Sap活性差异均具有统计学意义;敏感菌株组Sap活性低于耐药菌株组(F=18.693,P0.001)。2、小鼠人工菌血症模型的毒力致病性结果:氟康唑耐药组、伊曲康唑耐药组伏立康唑耐药组、交叉耐药组、敏感组、空白组小鼠的中位生存时间分别为22天、18天、13.5天、12天、20天和30天。通过Log-rank检验,不同组之间的生存时间差异有统计学意义(~(?2)=25.62,P=0.00),即耐药组菌株对小鼠的致病性及毒力明显高于敏感组。3、SAP2、ERG11的mRNA表达量检测结果:交叉耐药组SAP2的mRNA相对表达量为(6.9127±1.57)显著高于敏感菌株组(2.4418±0.91),P0.05,交叉耐药组SAP2的mRNA相对表达量高于单药耐药菌株(伊曲康唑耐药组(5.3164±0.56),氟康唑耐药组(5.2164±0.74),伏立康唑耐药组(5.5927±0.57))的表达量,P0.05。交叉耐药组ERG11的mRNA相对表达量(6.923±0.81)显著高于敏感菌株组(1.89±0.93),P0.05;交叉耐药组ERG11的mRNA相对表达量(6.923±0.81)显著高于单药耐药组的表达量(氟康唑耐药组(5.263±0.43),伊曲康唑耐药组(5.311±0.67),伏立康唑耐药组(6.022±0.29)),与氟康唑耐药组、伊曲康唑耐药组间的差异具有统计学意义(P0.05),与伏立康唑耐药间的差异无统计学意义P0.05。结论:1、白念珠菌耐药菌株中,Sap2活性增高,毒力致病性增强。2、SAP2、ERG11高表达与白念珠菌交叉耐药、单一耐药有一定的关系。3、白念珠菌SAP2和ERG11在唑类药物耐药中呈正相关,两基因间可能存在正性调节。
【图文】：

山西医科大学（博）硕士学位论文学方法PSS21.0软件分析结果，Sap活性检验结果用 x±s表示，多组数析。2 结 果检测的白念珠菌（氟康唑耐药组、伊曲康唑耐药组、伏立康唑、敏感组）均有透明环产生（见图 1、图 2），证明其均可以产00%，每株菌 3 份重复实验其透明环直径基本一致。通过方差分白念珠菌 Pz 值差异有统计学意义，P<0.001（实验结果见表 1）

山西医科大学（博）硕士学位论文学方法PSS21.0软件分析结果，Sap活性检验结果用 x±s表示，多组数析。2 结 果检测的白念珠菌（氟康唑耐药组、伊曲康唑耐药组、伏立康唑、敏感组）均有透明环产生（见图 1、图 2），，证明其均可以产00%，每株菌 3 份重复实验其透明环直径基本一致。通过方差分白念珠菌 Pz 值差异有统计学意义，P<0.001（实验结果见表 1）
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R446.5

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本文编号：2660311