【摘要】：目的通过初步研究探讨核因子-κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路抑制剂PS1145对脓毒症炎症反应影响,研究多糖-蛋白复合物(Glycocalyx,GCX)在脓毒症血管功能障碍中的作用以及其与血管内皮细胞NF-κB信号之间的关系,为脓毒症的治疗提供新的思路和方法。方法1、通过腹腔注射脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)(10 mg/kg)复制脓毒症小鼠模型(Lipopolysaccharide组,LPS组,简称L组);同时设立空白对照组(Control组,简称C组),予腹腔注射等剂量0.9%生理盐水;实验组为给腹腔注射LPS的小鼠采用尾静脉注射IκB激酶特异性阻滞剂PS1145(50mg/kg)抑制NF-κB信号(PS-1145 dihydrochloride+Lipopolysaccharide组,简称P组),实验共分三组,即C组,L组,P组。2、监测三组小鼠血流动力学情况,给予静脉注射去甲肾上腺素(300 ng/kg,iv)和乙酰胆碱(600 ng/kg,iv),通过监测小鼠模型给药后收缩压变化幅度值观察其对血管收缩剂和舒张剂的反应性。3、采用ELISA实验方法检测三组小鼠血浆中核心蛋白质多配体聚糖-1(Syndecan-1,SDC-1)水平以反映血管内皮多糖-蛋白复合物的情况。4、采用Western-Blot实验方法检测肠系膜动脉血管上内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)和诱导型一氧化氮合酶(induced nitric oxide synthase,i NOS)的表达情况,采用ELISA实验方法检测血浆中一氧化氮(Nitrogen Monoxide,NO)水平,探讨脓毒症血管功能障碍与血管内皮细胞NF-κB信号之间的关系。5、通过伊文思蓝染色(Evans blue dye,EBD)法测定小鼠心肌组织、肺脏和肠系膜组织EBD值,研究三组小鼠模型血管通透性的变化情况。6、通过湿干重比值测量观察三组小鼠心肌组织、肺脏和肠系膜组织的水肿情况。7、采用ELISA实验方法检测三组小鼠模型血浆中肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平以反映它们的炎症反应情况。结果1、造模后小鼠的一般情况:L组小鼠出现活动减少,精神萎靡,毛发直立,眼部脓性分泌物增多等脓毒症症状明显,P组小鼠上述症状较L组轻,C组无上述症状。三组小鼠模型的脓毒症状表现程度明显不一样(c2=12.9,p=0.002),差异有统计学意义。L组脓毒症状(平均秩12.5)明显高于C组(平均秩3.0)和P组(平均秩8.5)。2、三组小鼠模型血流动力学监测结果:(1)重复测量方差分析结果指出,三组小鼠模型基础收缩压值有时间效应(F=118.02,p=0.000),三组小鼠模型基础收缩压随时间变化组间均值差别有统计学意义(F=23.926,p=0.000)。三组小鼠没有使用血管活性药物时的收缩压基本情况:模型建立1 h时,L组基础收缩压(102.4±1.0 mm Hg)低于C组(113.3±1.528 mm Hg,p=0.000)和P组(104.0±1.0 mm Hg,p=0.004);模型建立2 h时,L组基础收缩压(102.0±1.0 mm Hg)明显低于C组(114.3±0.928 mm Hg,p=0.001),略低于P组(102.67±0.577 mm Hg,p0.05);模型建立6 h时,L组基础收缩压(85.67±1.528 mm Hg)明显低于C组(112.33±2.082 mm Hg,p=0.003)和P组(89.0±1.0 mm Hg,p=0.002)。(2)重复测量方差分析结果分析指出,三组小鼠模型对去甲肾上腺素收缩压增幅值没有时间效应(F=9.489,p=0.095)。三组小鼠对血管收缩剂反应性监测结果:模型建立1 h时,给小鼠尾静脉注射去甲肾上腺素(300 ng/kg)后,L组收缩压上升幅度(8.88±0.177 mm Hg)较C组(14.65±0.495 mm Hg,p=0.006)和P组(10.93±0.099 mm Hg,p=0.005)低;2、6 h结果类似。(3)重复测量方差分析结果分析指出,三组小鼠模型对乙酰胆碱收缩压减幅值没有时间效应(F=0.055,p=0.948)。三组小鼠对血管舒张剂反应性监测结果:模型建立1 h时,给小鼠尾静脉注射乙酰胆碱(600 ng/kg,iv)后,L组收缩压下降幅度(4.72±0.395 mm Hg)较C组(7.115±0.219 mm Hg,p=0.001)和P组(7.94±0.077 mm Hg,p=0.003)低;2、6 h结果类似。3、三组小鼠模型血浆中SDC-1检测结果:重复测量方差分析结果分析指出,三组小鼠模型SDC-1浓度随时间变化而变化(F=865.445,p=0.001)。模型建立1 h取得小鼠血浆测得,L组SDC-1浓度(121.12±3.76 ng/ml)较C组(93.64±3.64 ng/ml)高(p=0.003),较P组(144.30±6.3ng/ml,p=0.108)低;模型建立2 h取得小鼠血浆测得,L组SDC-1浓度(224.76±6.83ng/ml)较C组(98.80±0.35 ng/ml,p=0.002)和P组(197.54±3.91 ng/ml,p=0.001)高;模型建立6 h取得小鼠血浆测得,L组SDC-1浓度(324.06±1.93 ng/ml)明显高于C组(85.28±2.50 ng/ml,p=0.012)和P组(233.42±1.64 ng/ml,p=0.005)。4、三组小鼠模型血管功能障碍相关分子检测结果(1)三组小鼠模型肠系膜组织血管上e NOS、i NOS的表达水平Western-Blot检测结果:建立模型6 h取得小鼠肠系膜组织血管测得,L组e NOS表达相对灰度值(3.46±0.07)较C组(5.124±0.03)降低(p=0.013),P组e NOS表达相对灰度值(4.80±0.09)较L组升高(p=0.042);L组i NOS表达相对灰度值(0.572±0.003)较C组(0.331±0.001)升高(p=0.002),P组i NOS表达相对灰度值(0.538±0.005)较L组降低(p=0.003)。(2)三组小鼠模型血浆中NO ELISA检测结果:重复测量方差分析结果分析指出,三组小鼠模型NO浓度有时间效应(F=7.529,p=0.017)。模型建立1 h取得小鼠血浆测得,L组NO浓度(0.21±0.04mg/dl)较C组(0.18±0.08 mg/dl)高(p=0.044),P组NO浓度(0.33±0.01 mg/dl)较L组高(p=0.047);模型建立2 h取得小鼠血浆测得,L组NO浓度(1.23±0.03mg/dl)较C组(0.34±0.04 mg/dl,p=0.021)和P组(0.58±0.07 mg/dl,p=0.019)明显升高;模型建立6 h取得小鼠血浆测得,小鼠NO浓度较前有所下降,但L组NO浓度(0.37±0.07 mg/dl)较C组(0.15±0.03 mg/dl,p=0.025)和P组(0.22±0.03mg/dl,p=0.039)高。5、三组小鼠模型EBD染色测定结果模型建立6 h取得小鼠心肌组织、肠系膜组织、肺脏组织测得,L组EBD浓度均较C组和P组高(p0.05)。6、三组小鼠模型心肌组织、肺脏和肠系膜组织的湿干重比值(W/D)结果模型建立6 h取得小鼠心肌组织、肺脏组织、肠系膜组织测得,L组W/D值均大于C组和P组(p0.05)。7、三组小鼠模型血浆中TNF-ɑELISA检测结果重复测量方差分析结果分析显示,三组小鼠模型TNF-ɑ浓度没有时间效应(F=8.134,p=0.109)。模型建立1 h取得小鼠血浆测得,L组TNF-ɑ浓度(3695±29pg/ml)较C组(2115±27 pg/ml)高(p=0.001),P组TNF-ɑ浓度(4435±31 pg/ml)较L组高(p=0.081);模型建立2 h取得小鼠血浆测得,L组TNF-ɑ浓度(4099.99±22.56 pg/ml)高于C组(3691±26 pg/ml,p=0.003)和P组(3983.33±27.8pg/ml,p=0.017);模型建立6 h取得小鼠血浆测得,L组TNF-ɑ浓度(3699.66±21.73pg/ml)较C组(3008.21±50.08 pg/ml,p=0.001)和P组(3499.9±16.02 pg/ml,p=0.011)高。结论1、LPS可引起小鼠严重的脓毒症,表现为严重血管炎症反应,血压下降,对血管收缩剂和舒张剂反应性降低,血管内皮多糖-蛋白复合物损伤脱落,血管通透性增加和组织水肿严重。2、NF-κB信号通路抑制剂PS1145则可明显抑制脓毒症血管炎症反应,改善动物对血管收缩剂和舒张剂的反应性,减轻血管内皮多糖-蛋白复合物损伤脱落,改善血管通透性,减轻组织水肿。
【图文】：
6.25 0.0873.125 0.0551.5625 0.0430.78125 0.0390.390625 0.039表 1：倍比稀释 EBD 浓度与对应吸光度值注：EBD 指伊文思蓝染色(Evans blue dye）；OD 指吸光度
图 2 小鼠模型基础收缩压值比较注 * ：与 C 组对比 p<0.05；#：与 LPS 组对比 p<0.05；h 指小时；LPS(Lipopolysaccharide，，LPS)组；PS1145+LPS 组指 PS1145 dihydrochloride+Lipop组；数据采用均数±标准误（Mean±SEM）表示，每组样本量为 n=5；1、2、6较分析见重复测量分析结果。
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R459.7
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