Tenascin-X与CD34在动脉粥样硬化斑块形成过程中的表达及MR靶向斑块中Tenascin-X体内成像的实验研究
发布时间：2020-06-13 20:25
【摘要】：目的1.检测Tenascin-X与CD34在载脂蛋白E基因敲除(Apo E~(-/-))小鼠高脂肪饲养后主动脉斑块形成过程中的动态表达及探讨两者的相关性。2.探讨Tenascin-X靶向USPIO分子探针在主动脉斑块中的MR体内成像的可行性,为分子成像的扩展进一步提供实验研究。材料和方法1.高脂饲养雄性Apo E~(-/-)小鼠建立动脉粥样硬化(AS)动物模型为实验组,普通饲料喂养的雄性C57BL/6小鼠为对照组,两组研究数量均为25只。两组分别于喂养第8、12、20、28、36周时各取5只测其血脂水平,然后采集主动脉血管标本。油红O染色和苏木素-伊红染色(HE)观察主动脉斑块的病理学形态并进行计量组织学、Tenascin-X(TNX)与CD34免疫组织化学表达分析。2.高脂饲养雄性40只ApoE~(-/-)小鼠建立动脉粥样硬化动物模型,分别于喂养的第30周进行7.0磁共振扫描,扫描前随机将其分为实验组和对照组,每组各20只,每组小鼠在未打药前均进行首次腹主动脉扫描。扫描结束后实验组通过尾静脉注射由化学偶联法合成的靶向TNX的磁共振成像探针(anti-TNX-USPIO),对照组注射单纯的超微超顺磁性纳米氧化铁颗粒(USPIO)。于注射12h后再次进行MR成像,采用标准化相对信号改变率来计算斑块相对信号改变量。成像结束后取出小鼠腹主动脉标本进行TNX免疫组化染色和普鲁士蓝染色,观察斑块内TNX的表达和铁颗粒的沉积并分析斑块的信号改变。结果1.血脂水平分析显示低密度脂蛋白(LDL)、总胆固醇(TC)水平在实验组各期中均高于对照组(P0.05),而实验组中的高密度脂蛋白(HDL)和甘油三酯(TG)仅在28周和32周高于对照组。随着饲养时间的延长,实验组的斑块面积及斑块面积/正常管腔面积比值不断增加(斑块面积:F=313.914,p0.001;斑块面积/正常管腔面积:F=213.215,P0.001)。斑块内TNX与CD34的表达量随着饲养时间的增加而增多,两者均在36周时表达最多(TNX:0.541±0.074 vs 0.054±0.006、0.146±0.024、0.213±0.011、0.322±0.029;CD34:0.411±0.032 vs 0.150±0.033、0.198±0.013、0.220±0.013、0.387±0.055),并且TNX与CD34阳性微血管均在纤维帽及脂质核心周围高表达且呈正相关(r=0.87,P0.001)。而对照组各期中斑块形成不明显。2.实验组打药后12h斑块信号降低较对照组明显,并且斑块信号改变率较对照组具有统计学意义(实验组12h:-24.98±13.54%vs对照组12h:-4.88±3.08%,F=23.152,P0.001)。免疫组化染色显示实验组和对照组斑块中均存在Tenascin-X表达及普鲁士蓝铁颗粒沉积,并且普鲁士蓝染铁颗粒在实验组斑块中明显高于对照组。结论1.Tenascin-X和CD34的表达量随着斑块进展而增多,且两者在斑块中的表达区域相似。TNX可能与斑块中新生血管的形成密切相关。2.anti-TNX-USPIO探针可活体检测动脉粥样硬化斑块中Tenascin-X的表达,且斑块的相对信号改变率为斑块中TNX的吸收提供一种定量的评估方法。为动脉粥样硬化分子成像进一步奠定了基础。
【图文】：
3. 统计学分析采用 SPSS18.0 软件进行数据处理，计量资料以组间比较采用单因素方差分析,多组中的两两比significance difference，LSD-t），利用 pearson 做相关有统计学意义。二、结果2.1 实验组小鼠不同时期体重变化（图 1）总体而言，小鼠体重在饲养前 4 月中为体重增重维持在 30.92±0.55 g，在饲养 6 月时稍降低。（135，30，25，25，19，18，12，10），测量数量根自然死亡数量决定。
36周 对照组 28周 36周图 2.ApoE 基因敲除小鼠主动脉 HE 染色和油红 O 染色 (x 100 )。实验组饲养 8 周时内膜局部脂质沉积增厚； 12 周时斑块内胶原纤维增生，出现少许脂质核心； 20 周时纤维帽局部变薄，连续性中断；28 周时斑块局部断裂，局部可见胆固醇结晶堆积；36 周时斑块体积明显变大，坏死核心增大，管腔明显狭窄，甚至闭塞；对照组血管内膜细胞排列整齐，无斑块形成。28 周和 36 周的油红 0 染色(x 200)：斑块中红色代表脂质成分，36 周时斑块中脂质成分较 28 周增多。2.4 实验组小鼠各时期 AS 斑块面积（表 2）实验组自喂养 8 周起开始有斑块形成，随着饲养时间延长，LA 差异未见明显变化（F=0.033,P=0.998），而斑块面积 PA 和斑块狭窄率，即 PA/LA 比值随着饲养时间的增加而不断增加（PA：F=313.914，P<0.001；PA/LA：F=213.215，P<0.001），LSD 比较 PA 和 PA/LA，任意两时期比较均有统计学意义（P 均<0.05），，而对照组各时期主动脉未见明显斑块形成。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R543.5;R445.2
本文编号：2711695
【图文】：
3. 统计学分析采用 SPSS18.0 软件进行数据处理，计量资料以组间比较采用单因素方差分析,多组中的两两比significance difference，LSD-t），利用 pearson 做相关有统计学意义。二、结果2.1 实验组小鼠不同时期体重变化（图 1）总体而言，小鼠体重在饲养前 4 月中为体重增重维持在 30.92±0.55 g，在饲养 6 月时稍降低。（135，30，25，25，19，18，12，10），测量数量根自然死亡数量决定。
36周 对照组 28周 36周图 2.ApoE 基因敲除小鼠主动脉 HE 染色和油红 O 染色 (x 100 )。实验组饲养 8 周时内膜局部脂质沉积增厚； 12 周时斑块内胶原纤维增生，出现少许脂质核心； 20 周时纤维帽局部变薄，连续性中断；28 周时斑块局部断裂，局部可见胆固醇结晶堆积；36 周时斑块体积明显变大，坏死核心增大，管腔明显狭窄，甚至闭塞；对照组血管内膜细胞排列整齐，无斑块形成。28 周和 36 周的油红 0 染色(x 200)：斑块中红色代表脂质成分，36 周时斑块中脂质成分较 28 周增多。2.4 实验组小鼠各时期 AS 斑块面积（表 2）实验组自喂养 8 周起开始有斑块形成，随着饲养时间延长，LA 差异未见明显变化（F=0.033,P=0.998），而斑块面积 PA 和斑块狭窄率，即 PA/LA 比值随着饲养时间的增加而不断增加（PA：F=313.914，P<0.001；PA/LA：F=213.215，P<0.001），LSD 比较 PA 和 PA/LA，任意两时期比较均有统计学意义（P 均<0.05），，而对照组各时期主动脉未见明显斑块形成。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R543.5;R445.2
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1 周明;Tenascin-X与CD34在动脉粥样硬化斑块形成过程中的表达及MR靶向斑块中Tenascin-X体内成像的实验研究[D];南京医科大学;2019年
本文编号：2711695
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