人脐带间充质干细胞来源exosomes的安全性评价

发布时间：2017-03-28 20:19

  本文关键词：人脐带间充质干细胞来源exosomes的安全性评价，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景目的:临床Ⅰ期和Ⅱ期实验已经证实间充质干细胞(MSCs)可以对急性心肌梗死(AMI)进行损伤修复,但是由于MSCs存在移植存活率低、加重狭窄及致瘤性安全隐患等不足使得其在临床上的应用受到限制。越来越多的证据表明,以MSCs旁分泌来源的exosomes(MSC-exosomes)为基础的移植比MSCs本身更具有潜在的保护作用和修复效果。但是,MSC-exosomes的应用是否安全可靠还尚不清楚。在本实验中,我们采用了多种动物模型,比较全面地评估了人脐带间充质干细胞来源的exosomes(hucMSC-exosomes)的安全性。方法:取来自健康家兔的心脏血液,去除纤维蛋白原后,取沉淀的红细胞(RBC)用生理盐水配制成2%的RBC悬液,与hucMSC-exosomes 37℃共温浴,在3h内观察其溶血和RBC沉降情况;分别将hucMSC-exosomes沿耳缘静脉和股四头肌注入家兔体内,观察血管充血是否正常,周围组织有无肿胀,注射点肌纤维横纹是否清晰,肌间有无出血,有无炎性细胞浸润等病理变化,并取注射点部位血管、肌肉及周围组织做组织学切片,采用苏木精-伊红(HE)染色的方法,综合评价hucMSC-exosomes是否具有刺激性;对豚鼠腹腔注射hucMSC-exosomes,每隔一天致敏1次,第3次致敏14天后进行末次致敏,观察并记录豚鼠的过敏症状以及症状所出现的时间,综合评价hucMSC-exosomes是否含有过敏原;将hucMSC-exosomes沿耳缘静脉输注入家兔体内,每隔一小时测定1次肛温,总共3次,根据温度的变化程度来分析其是否含有致热源;取健康Sprague-Dawley(SD)大鼠,尾静脉注射hucMSC-exosomes,定期采血并测定hucMSC-exosomes对血常规指标的影响;为了评价hucMSC-exosomes在体内的安全性,我们建立了SD大鼠的AMI模型,分别选取400μg和800μg剂量的hucMSC-exosomes沿尾静脉注射入大鼠体内,每天1次,连续7天,之后密切观察SD大鼠的生长情况,并定期对其称重采血,检测hucMSC-exosomes对肝功能及肾功能是否有不良影响。结果:hucMSC-exosomes不会引起溶血反应,对注射点的血管、肌肉及周围组织都没有刺激性,不含有过敏原和致热源,对血常规指标没有不良影响,对AMI模型的大鼠体重的降低有一定的缓解作用并且对肝功能、肾功能都没有副作用,各项结果都显示hucMSC-exosomes是安全可靠可以被应用的。结论:hucMSC-exosomes在动物模型中耐受并且通过静脉输注的方式安全可靠,这为今后huc MSC-exosomes的临床应用提供了依据。
【关键词】：人脐带 间充质干细胞 exosomes 安全性 急性心肌梗死 静脉输注
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R457.7
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-14
• 第一章 绪论14-22
• 1.1 间充质干细胞14-16
• 1.1.1 间充质干细胞生物学特性与功能14-15
• 1.1.2 人脐带间充质干细胞生物学特性与功能15
• 1.1.3 间充质干细胞的局限性15-16
• 1.2 Exosomes16-22
• 1.2.1 Exosomes生物学特性及功能16-18
• 1.2.2 Exosomes与急性心肌梗死18-19
• 1.2.3 Exosomes与肿瘤19-20
• 1.2.4 Exosomes与免疫调节20-22
• 第二章 研究目的、方法、实验设计方案和意义22-25
• 2.1 研究目的22
• 2.2 研究方法22-23
• 2.3 实验设计方案23
• 2.4 研究意义23-25
• 第三章 hucMSC-exosomes的分离及鉴定25-31
• 3.1 材料与仪器25-26
• 3.1.1 主要材料25
• 3.1.2 主要仪器25-26
• 3.2 方法26-28
• 3.2.1 hucMSC的分离与培养26-27
• 3.2.2 hucMSC-CM的制备27
• 3.2.3 hucMSC-exosomes的分离提取27
• 3.2.4 纳米颗粒分析仪检测hucMSC-exosomes的大小及浓度27
• 3.2.5 Western blot检测hucMSC-exosomes相关蛋白CD9和CD81的表达27-28
• 3.3 结果28-30
• 3.3.1 hucMSCs形态学特征28
• 3.3.2 纳米颗粒分析仪检测hucMSC-exosomes的大小及浓度28-29
• 3.3.3 Western blot检测hucMSC-exosomes的表面标志物29-30
• 3.4 讨论30-31
• 第四章 hucMSC-exosomes对AMI模型的影响31-37
• 4.1 材料与仪器31
• 4.1.1 主要材料31
• 4.1.2 主要仪器31
• 4.2 方法31-33
• 4.2.1 SD大鼠AMI模型的构建31-32
• 4.2.2 hucMSC-exosomes对AMI模型大鼠的影响32-33
• 4.2.3 实验数据处理及统计分析33
• 4.3 结果33-35
• 4.3.1 hucMSC-exosomes对SD大鼠体重的影响33-34
• 4.3.2 hucMSC-exosomes对SD大鼠肝功能的影响34
• 4.3.3 hucMSC-exosomes对SD大鼠肾功能的影响34-35
• 4.4 讨论35-37
• 第五章 huc MSC-exosomes自身安全性鉴定37-46
• 5.1 材料与仪器37
• 5.1.1 主要材料37
• 5.1.2 主要仪器37
• 5.2 方法37-41
• 5.2.1 溶血试验37-38
• 5.2.2 血管刺激反应38-39
• 5.2.3 肌肉刺激反应39
• 5.2.4 全身性过敏反应39-40
• 5.2.5 致热源检测40-41
• 5.2.6 血常规检测41
• 5.2.7 实验数据处理及统计分析41
• 5.3 结果41-44
• 5.3.1 hucMSC-exosomes不引起溶血反应41-42
• 5.3.2 hucMSC-exosomes对血管无刺激性42
• 5.3.3 hucMSC-exosomes对肌肉无刺激性42-43
• 5.3.4 hucMSC-exosomes过敏原阴性43
• 5.3.5 hucMSC-exosomes致热源阴性43
• 5.3.6 hucMSC-exosomes对血常规无不良影响43-44
• 5.4 讨论44-46
• 结论与展望46-47
• 结论46
• 展望46-47
• 参考文献47-59
• 致谢59-60
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文60

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