大肠埃希菌耐多药和耐消毒剂基因检测及遗传同源性分析

发布时间：2020-07-24 18:55

【摘要】：目的:了解本地区大肠埃希菌(Escherichia coli)耐多药情况、产超广谱β内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase,ESBLs)基因及耐消毒剂基因的携带状况,分析基因与耐药表型之间的关系;应用ERIC-PCR对大肠埃希菌进行遗传同源性统计分析。方法:1.药敏实验:采用纸片扩散法测定本地区138株大肠埃希菌临床菌株对17种常见抗菌药物的耐药性,参照临床和实验室标准协会(CLSI)标准判定耐药情况,并筛选得到ESBLs菌株进行判定。2.PCR扩增检测及测序:通过PCR扩增检测产超广谱β内酰胺酶基因CTX-M、TEM、SHV及耐消毒剂基因qacEΔ1、qacE,并将PCR阳性反应产物送擎科生物科技有限公司测序。3.ERIC-PCR基因分型:应用该方法扩增各大肠埃希菌基因组DNA,检测其可扩增出的条带类型,采用SPSS 22.0软件进行遗传同源性聚类分析。结果:1.药敏检测结果:1.1 138株大肠埃希菌临床分离株对四类17种抗菌药物耐药情况:耐复方新诺明97株(70.29%)、耐萘啶酸115株(83.33%)、耐诺氟沙星77株(55.80%)、耐环丙沙星77株(55.80%)、耐左氧氟沙星54株(39.13%)、耐头孢西丁4株(2.90%)、耐头孢呋辛94株(68.12%)、耐头孢他啶23株(16.67%)、耐头孢噻肟55株(39.86%)、耐头孢曲松64株(46.38%)、耐哌拉西林85株(61.60%)、耐哌拉西林/他唑巴坦5株(0.72%)、耐氨曲南39株(28.26%)、耐链霉素87株(63.04%)、耐庆大霉素64株(46.38%)、耐阿米卡星5株(3.62%)、亚胺培南全部敏感。1.2耐药模式分布情况:耐多药菌株98株(71.01%),双耐药菌株27株(19.57%),单耐药6株(4.35%),全敏感菌株7株(5.07%)。1.3产ESBLs菌株检出情况:138株临床分离的大肠埃希菌中共检出ESBLs阳性菌株86株(62.31%)。产ESBLs菌株在不同耐药模式分布:多耐药模式77株(89.53%),双耐药模式9株(10.47%),在单耐药、全敏模式菌株中未检出ESBLs阳性菌株。经χ~2检验比较ESBLs阳性菌株与ESBLs阴性菌株对复方新诺明、萘啶酸、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、氨曲南、头孢呋辛、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、哌拉西林、链霉素、庆大霉素的耐药性,耐药性具有显著差异。2.耐药酶与耐消毒剂基因检测结果:2.1 CTX-M、TEM、SHV型ESBLs耐药基因检测结果:138株E.coli临床分离株中,94株(68.12%)带有blaTEM基因,79株(57.25%)带有blaCTX-M基因,1株(0.72%)带有blaSHV基因。耐多药E.coli菌株中检出blaCTX-M阳性菌株70株(71.43%),blaTEM阳性菌株70株(71.43%),blaCTX-M+blaTEM阳性菌株48株(48.98%),通过χ~2检验比较不同耐药类型菌株中blaCTX-M、blaTEM、blaCTX-M+blaTEM检出率,三种基因检出率存在显著差异。2.2耐消毒剂基因检出情况:138株大肠埃希菌临床分离株中检出qacEΔ1阳性菌株71株(51.45%),均未检测出qacE基因。qacEΔ1阳性菌株与qacEΔ1阴性菌株对复方新诺明、萘啶酸、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢呋辛、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、庆大霉素的耐药性比较,耐药性具有显著差异。在耐多药E.coli菌株中检出qacEΔ1阳性菌株63株(88.73%),非耐多药菌株检出qacEΔ1阳性菌株8株(11.27%),通过χ~2检验比较耐多药菌株及非耐多药菌株耐消毒剂基因qacEΔ1检出率,在两种耐药类型的大肠杆菌中耐消毒剂基因qacEΔ1的检出率存在显著性差异。3.ERIC-PCR结果:ERIC-PCR指纹图谱扩增条带数2～7条,产物分布在100 bp-2500bp;分为63个谱型。以80%的遗传相似性划分,聚类分析得出的结果43个类型,常见类型有三个(E23、E24和E27)。E23包括耐多药菌株7株,双耐药菌株3株;ESBLs表型阳性菌株5株;产CTX-M型ESBLs菌株5株;产TEM型ESBLs菌株8株;产耐消毒剂基因qacEΔ1菌株5株;源自泌尿系感染菌株4株,血流感染1株,呼吸系统1株,其他感染类型4株;源自内科3株,外科5株,妇产科1株,儿科1株。E24包括耐多药菌株11株,双耐药菌株1株;ESBLs表型阳性菌株7株;产CTX-M型ESBLs菌株6株;产TEM型ESBLs菌株8株;产耐消毒剂基因qacEΔ1菌株8株;源自泌尿系感染菌株4株,血流感染2株,其他感染类型6株;源自内科4株,外科6株,妇产科2株,儿科0株。E27包括多耐药菌株7株,双耐药菌株2株,单耐药菌株1株;ESBLs表型阳性菌株7株;产CTX-M型ESBLs基因7株;产TEM型ESBLs基因6株;耐消毒剂基因qacEΔ1基因5株;源自泌尿系感染菌株2株,血流感染2株,呼吸系统2株,其他感染类型4株;源自内科4株,外科6株,妇产科0株,儿科0株。结论:1.本地区E.coli均表现出对常用抗菌药物一定程度的耐药,且以耐多药模式常见;但对阿米卡星、β内酰胺类抗菌药物+酶抑制剂、头酶素类及碳青霉烯类抗菌药物的敏感性较高。2.ESBLs耐药基因以blaCTX-M、blaTEM型为主,耐多药菌株中blaCTX-M+blaTEM复合存在现象常见。3.耐消毒剂基因qacEΔ1检出率高,以耐多药菌株多见。4.同一类型菌株的耐药性、基因携带情况、感染类型及科室分布情况经遗传同源性分析,未发现存在明显聚集现象。
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R446.5
【图文】：

西 南 医 科 大 学 硕 士 学 位 论 文经χ2检验比较 ESBLs 阳性菌株与 ESBLs 阴性菌株的耐药性，对复方新诺明、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢呋辛、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、哌拉西林、氨曲南、萘啶酸、链霉素、庆大霉素的耐药性比较，P 值均小于 0.05，差异具有统计学意义。对头孢西丁、哌拉西林他唑巴坦、阿米卡星的耐药性比较，P 值均大于 0.05，差异不具有统计学意义。

图 2 产 ESBLs 菌株的标本来源Fig.2 Specimens source of ESBLs-producing strain产 ESBLs 菌株在不同耐药模式分布：耐多药模式 77 株（89.53%药模式 9 株（10.47%），在单耐药、全敏模式菌株中未检出 E菌株。经χ2检验比较ESBLs阳性菌株与ESBLs阴性菌株的耐药模小于 0.05，差异具有统计学意义。具体见表 7。表 7 ESBLs 阳性菌株和 ESBLs 阴性菌株的耐药模式比较Table 7 Comparison between ESBLs positive and negative strain 耐多药菌株耐药情况分析ESBLs（+）（n=86）ESBLs（-）（n=52）χ2检验P 值耐多药菌株 77 21非耐多药菌株 9 31 0.000

图 3 blaTEM 检出情况Fig.3 blaTEM detection注：M 为 Maker,1，3，5，9，10，11 号菌株 blaTEM 阳性，2，4，blaTEM 阴性图 4 blaCTX-M 检出情况Fig.4 blaCTX-M detection注：M 为 Maker，2，3，4，5，8 号菌株 blaCTX-M 阳性，1，6-7，9-12 号阴性

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本文编号：2769256