PDTC对BMSC移植治疗MODS大鼠的炎症调控作用及HMGB1的表达研究

发布时间：2020-08-06 09:01

【摘要】：[目的]探究核转录因子-κB(NuclearFactor-kappaB,NF-κB)的抑制剂——吡咯烷二硫代氨基甲酸(Pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stromal cells,BMSC)治疗多器官功能障碍综合征(Multiple organ dysfunction syndrome,MODS)大鼠中高迁移率族蛋白B1(High mobility group protein B1,HMGB1)的表达及其所介导的炎症信号通路的调控作用,为临床治疗MODS提供新的理论及实验依据。[方法]体外提取并培养SD(Sprague Dawley,SD)大鼠的BMSC,取第4代BMSC用于实验;将雌性SD大鼠按照随机数字表法分成5组,每组20只:假手术组(Sham)组、MODS 组、BMSC 组、MODS+PDTC(M+P)组,MODS+BMSC+PDTC(M+B+P)组。经外周静脉注射脂多糖(LPS)1mg/kg建立MODS模型,Sham组注射等量磷酸盐缓冲液,BMSC组在造模后2h将BMSC(106个/只,用生理盐水稀释至0.5ml)经尾静脉输注到动物体内,M+P组在造模后2h给予PDTC(120mg/kg,腹腔注射,一天一次),M+B+P组在BMSC治疗MODS后2h给予PDTC,剂量及方法同上。观察各组动物的一般情况及存活率;抽取各组动物在1d、3d的血液,检测血常规(白细胞WBC、中性粒细胞百分比NEU%)、肾功能指标(尿素氮BUN、血肌酐Scr)、心肌酶学指标(肌酸激酶同工酶CK-MB、乳酸脱氢酶LDH);然后取术后3d各组动物的肾脏、心脏进行苏木素-伊红染色(HE),观察各器官的形态学变化;并采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)技术及蛋白印迹法(Western Blot)检测1d及3d时p-p65(NF-κB的活化成分)、HMGB1 及其 TOLL 样受体-4(Toll-like Receptor-4,TLR4)在肾脏及心脏器官中的表达变化。[结果](1)各组动物的一般情况及存活率:Sham组动物的一般情况变化不大;MODS组动物的活动减弱,精神萎靡;经BMSC或/和PDTC治疗后,动物一般情况较MODS组好转;在术后1d,这五组动物的存活率依次是100%、60%、70%、70%、80%,后续时间点无新发死亡。(2)与Sham组比较,MODS组中血常规、肾功能及心肌酶学指标的水平明显异常(P0.05),HE染色显示组织中大量炎症细胞浸润,充血、淤血、水肿,损伤明显;经BMSC或PDTC治疗后各器官功能指标明显改善,组织损伤不同程度减轻;而且经BMSC联合PDTC治疗后,组织结构修复情况比单独使用BMSC或PDTC更加显著。(3)Q-PCR及Western Blot的检测结果显示:经LPS刺激后,在肾脏及心脏中HMGB1、TLR4及p-p65的表达水平较Sham组均明显上调(P0.05);经BMSC或PDTC治疗后,这三个因子的表达水平较MODS组明显降低(P0.05),而且这两组比较,大部分因子的表达水平无明显变化(P0.05);M+B+P组,这三个因子的表达较MODS组明显下降(P0.05)。此外,与单独使用BMSC或PDTC比较,部分因子的表达明显下调(P0.05)。[结论](1)LPS诱导的MODS可导致HMGB1及其受体TLR4的过表达,激活NF-κB。(2)BMSC的移植治疗能抑制HMGB1介导的炎症信号通路,减弱LPS引起的器官功能损害,减轻组织损伤,提高存活率。(3)PDTC能够抑制NF-κB的活化,保护各脏器功能,下调HMGB1-TLR4的表达,降低死亡率,这些作用与BMSC一致,而且两者联合其治疗效应增强。(4)BMSC调节炎症反应的机制之一可能是抑制HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路的激活。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R459.7
【图文】：

模型建立,统计学意义,检测结果,功能变化

３器官功能的变化逡逑３．１邋ＭＯＤＳ模型中各器官功能变化逡逑各项指标检测结果提示（表１及图１）：与Ｓｈａｍ组比较，造模后２４ｈ：白逡逑细胞（ＷＢＣ）的水平明显降低，小于２倍Ｓｈａｍ组（Ｐ＜０．０５）；中性粒细胞的百逡逑分数（ＮＥＵ％）大于邋２邋倍邋Ｓｈａｍ邋组（Ｐ＜０．０５）。逡逑肝肾功能指标：ＴＢ的水平大于２倍Ｓｈａｍ组，ＡＬＴ水平虽然升高，但无统逡逑计学意义（Ｐ＞0．0５），谷草转氨酶（ＡＳＴ）的水平明显升高，接近Ｓｈａｍ组的２逡逑２９逡逑

时间点,中性粒细胞,白细胞,无明

注：＊表示与Ｓｈａｍ组比较，＃表示与ＭＯＤＳ组比较，ａ表示与ＢＭＳＣ组比较，ｂ逡逑表示与Ｍ＋Ｐ组比较，＆表示组内与Ｉｄ组比较Ｐ＜０．０５，差异有统计学意义。逡逑３．２．２肾功能指标变化（图３）逡逑尿素氮（ＢＵＮ）检测结果（表４）：组间比较，与Ｓｈａｍ组比较，ＭＯＤＳ组逡逑的ＢＵＮ水平在Ｉｄ及３ｄ虽然升高，但Ｐ＞０．０５，无统计学意义，其他三组在Ｉｄ逡逑及３ｄ时其水平均无明显变化（Ｐ＞０．０５）。与ＭＯＤＳ组比较，ＢＭＳＣ组在Ｉｄ及逡逑３ｄ时其水平均下降，但在３ｄ时明显下降（Ｐ＜０．０５）邋；邋Ｍ＋Ｐ组、Ｍ＋Ｂ＋Ｐ组的变逡逑化情况与ＢＭＳＣ组一致，在Ｉｄ时下降不明显（Ｐ＞０．０５），在３ｄ时明显下降逡逑（Ｐ＜０．０５）。ＢＭＳＣ组、Ｍ＋Ｐ组以及Ｍ＋Ｂ＋Ｐ组这三组在同一时间点间两两比较逡逑均无明显变化（Ｐ＞０．０５）。逡逑组内不同时间点比较，仅Ｍ＋Ｐ组在３ｄ时比Ｉｄ明显降低（Ｐ＜０．０５）。其他四逡逑组在Ｉｄ与３ｄ之间比较，ＢＵＮ水平无明显变化，Ｐ＞０．０５，无统计学意义。逡逑４邋８１＾在各组不同间点的（无±１？，位＿0１几）逡逑

组内,统计学意义,时间点,无明

注：＊表示与Ｓｈａｍ组比较，＃表示与ＭＯＤＳ组比较，ａ表示与ＢＭＳＣ组比较，ｂ逡逑表示与Ｍ＋Ｐ组比较，＆表示组内与Ｉｄ组比较Ｐ＜０．０５，差异有统计学意义。逡逑３．２．２肾功能指标变化（图３）逡逑尿素氮（ＢＵＮ）检测结果（表４）：组间比较，与Ｓｈａｍ组比较，ＭＯＤＳ组逡逑的ＢＵＮ水平在Ｉｄ及３ｄ虽然升高，但Ｐ＞０．０５，无统计学意义，其他三组在Ｉｄ逡逑及３ｄ时其水平均无明显变化（Ｐ＞０．０５）。与ＭＯＤＳ组比较，ＢＭＳＣ组在Ｉｄ及逡逑３ｄ时其水平均下降，但在３ｄ时明显下降（Ｐ＜０．０５）邋；邋Ｍ＋Ｐ组、Ｍ＋Ｂ＋Ｐ组的变逡逑化情况与ＢＭＳＣ组一致，在Ｉｄ时下降不明显（Ｐ＞０．０５），在３ｄ时明显下降逡逑（Ｐ＜０．０５）。ＢＭＳＣ组、Ｍ＋Ｐ组以及Ｍ＋Ｂ＋Ｐ组这三组在同一时间点间两两比较逡逑均无明显变化（Ｐ＞０．０５）。逡逑组内不同时间点比较，仅Ｍ＋Ｐ组在３ｄ时比Ｉｄ明显降低（Ｐ＜０．０５）。其他四逡逑组在Ｉｄ与３ｄ之间比较，ＢＵＮ水平无明显变化，Ｐ＞０．０５，无统计学意义。逡逑表４邋８１＾在各组不同时间点的变化（无±１？

【参考文献】