大鼠创伤性休克早期血脑屏障通透性动态变化及盐酸戊乙奎醚对其的保护机制
发布时间：2020-08-13 14:01
【摘要】：研究背景创伤性休克后血脑屏障(Blood-brain Barrier,BBB)的动态损伤不明确;BBB损伤是否由NF-κB调控亦需进一步研究;新型高选择性胆碱受体阻滞剂盐酸戊乙奎醚(Penehyclidine Hydrochloride,PHC)是否对创伤性休克后BBB损伤有保护作用及具体作用机制仍值得探讨。在前期研究基础上,本课题旨在探讨创伤性休克后血脑屏障通透性动态变化规律、NF-κB信号通路对其的调控作用以及PHC的保护作用及分子机制。第一章 大鼠创伤性休克早期血脑屏障通透性动态变化[目的]探讨创伤性休克后早期BBB通透性动态变化规律。[方法]复制创伤性休克大鼠模型。大鼠分为5组:Con、Shock、LR1h、LR2h、LR6h组。检测各组脑组织含水量、荧光素钠含量,电镜观察超微结构,qPCR法和Western blot法分别检测NKCC1、VEGF、Occludin、Claudin-5mRNA和蛋白表达以及NF-κB p65蛋白表达。[结果]1.与con组比较,Shock组脑组织含水量和荧光素钠含量显著增加,血脑屏障超微结构受损,NKCC1、VEGF和p65表达显著增加,而occludin、claudin-5表达降低。2.创伤性休克常规乳酸林格液复苏后6h内,随时间延长,脑组织含水量和荧光素钠含量递增,血脑屏障超微结构病理损害加重,NKCCI、p65表达递增,而occludin、claudin-5 表达递减。3.常规乳酸林格液复苏后VEGF表达峰值与BBB通透性损伤变化趋势不同步。4.NF-κB p65蛋白表达在复苏后6h内呈递增趋势,与BBB通透性变化吻合。[结论]创伤性休克及常规复苏后6h内,BBB通透性随时间延长而损伤加重,跨细胞途径和细胞旁途径均有受损,而VEGF和NF-κB可能均参与了BBB通透性动态损伤的病理过程。第二章 NF-κB信号通路在创伤性休克后血脑屏障通透性改变中的调控作用[目的]探讨NF-κB信号通路在创伤性休克后BBB通透性变化中的调控作用。方法:大鼠分为4组:Con组、Shock组、LR6h组、PDTC6h组。其余方法同第一章。[结果]与LR6h组比较,PDTC6h组脑组织含水量和荧光素钠含量明显降低,NKCC1、VEGF和p65表达显著下降,而occludin、claudin-5表达显著增加。[结论]NF-κB通过调控细胞旁途径和跨细胞途径双重途径,直接参与了创伤性休克后继发BBB通透性损伤的病理过程。第三部分 盐酸戊乙奎醚(PHC)对创伤性休克后血脑屏障的保护作用及可能机制[目的]探讨PHC对创伤性休克后BBB的保护作用及可能机制。[方法]大鼠分4组:Con组、Shock组、LR6h组、PHC6h组。其余方法同第一章。[结果]与LR6h组比较,PHC6h组脑组织含水量和荧光索钠含量明显降低,NKCC1、VEGF和NF-κB p65表达显著下降,而occludin、claudin-5 表达增加。[结论]PHC能明显减轻创伤性休克后BBB损伤,涉及跨细胞及细胞旁途径,其机制不仅通过抑制VEGF表达,还与抑制NF-κB活化有关。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R459.7
【图文】：
由内皮细胞、基底膜、星形胶质细胞足突和周细胞组成。由此可知，ＢＢＢ是神逡逑经血管单元的核心结构，而血管内皮细胞及内皮细胞间紧密连接是构成ＢＢＢ通逡逑透性的基础［１９，２（）］，见图１。因此，血液中物质通过血脑屏障必须通过两种途径：逡逑穿内皮细胞途径（物质从血液通过内皮细胞进入脑组织）和细胞旁途径（主要逡逑经紧密连接）。相应地，血脑屏障通透性的变化和调节也分为穿细胞途径和旁细逡逑胞途径两个方面。逡逑紧密连接（Ｔｉｇｈｔ邋Ｊｕｎｃｔｉｏｎ，ＴＪ）位于血管内皮细胞间顶端，是调节血脑屏逡逑障通透性的最主要分子结构，亦是细胞旁途径的主要组成部分。Ｏｃｃｌｕｄｉｎ邋（闭逡逑锁蛋白）和Ｃｌａｕｄｉｎ－５邋（封闭蛋白）是两种紧密连接结构蛋白，对血脑屏障通透逡逑性起重要调节作用［２１’２２］：邋Ｏｃｃｌｕｄｉｎ主要发挥２种功能：①栅栏功能有助于细胞逡逑极性形成，阻止不同功能区之间的物质互相扩散；②屏障调节功能可以调节小逡逑分子运输，维持组织稳态。Ｃｌａｕｄｉｎ－５对维持紧密连接的完整性及正常生理功能逡逑起着重要作用，是脑血管内皮细胞紧密连接中的特异性蛋白。研宄表明，大脑逡逑中动脉线栓法导致局灶性脑缺血后
盐酸戊乙奎醚（Ｐｅｎｅｈｙｃｌｉｄｉｎｅ邋Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ，ＰＨＣ）又名长托宁，是一种新逡逑型抗胆碱药，化学结构为３－（邋２－羟基－２－环戊基－２－苯基乙氧基）奎宁环烷，结构式见逡逑图２［３７］。ＰＨＣ对Ｍ受体亚型有高度选择性，迄今为止，己在有机磷农药中毒及肾、逡逑胆绞痛的治疗中得到广泛应用Ｍ受体是毒蕈碱型受体（ｍｕｓｃａｒｉｎｉｃ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ）逡逑的简称。Ｍ受体共分为三个亚型，其中型主要分布于脑和胃黏膜，Ｍ２亚型逡逑主要分布在神经元突触前膜和心脏，Ｍ３亚型受体则主要分布在腺体和平滑肌。逡逑ＰＨＣ对Ｍ２受体无作用，主要作用于ＭｊｎＭ３受体，因此，ＰＨＣ可缓解平滑肌痉挛、逡逑改善微循环而无心率加快等副作用。而且ＰＨＣ的半衰期远大于阿托品，达阿托品逡逑的２．５倍［３９］，解痉效果也比阿托品强［４（）］，从而可提供更长时间更强效的微循环改逡逑善作用。因其用药次数减少，可节约医疗资源、增加易操作性及依从性。多项逡逑研宄证明［４１４４］，对于大鼠脑缺血－再灌注损伤和脑水肿，ＰＨＣ有明显保护作用，逡逑但其具体作用机制尚未完全明确。另有研究表明
逑障中上述分子的病理表达，起到保护创伤性休克后血脑屏障通透性的作用。逡逑ＮＦ－ｋＢ通路示意图及本研究立题假设见图３，旨在探讨创伤性休克早期血脑屏障逡逑通透性动态变化规律、ＮＦ－ｋＢ信号通路对其的调控作用以及ＰＨＣ对其的保护作用逡逑及分子机制。为临床应用ＰＨＣ来防治创伤性休克继发脑损伤及ＭＯＤＳ提供进一步逡逑的理论依据。逡逑创伤和休克逡逑逦逦逡逑ｆ逡逑胞d阱澹у五义希苠危校龋缅逡种棋义辖猓跎馘义县咤澹桑耍耍㈠危危疲耄洛宥坼义襄危掊翁迦胂赴隋义希掊味盏枷掠五义匣颍桑呕虻腻义希危疲妫洛巫煎义希郑眨忮五五五五义襄五义希ュ危桑耄路核鼗暗鞍酌附到猓头牛危疲耄洛义襄五五义习隋危掊义希
本文编号：2792097
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R459.7
【图文】：
由内皮细胞、基底膜、星形胶质细胞足突和周细胞组成。由此可知，ＢＢＢ是神逡逑经血管单元的核心结构，而血管内皮细胞及内皮细胞间紧密连接是构成ＢＢＢ通逡逑透性的基础［１９，２（）］，见图１。因此，血液中物质通过血脑屏障必须通过两种途径：逡逑穿内皮细胞途径（物质从血液通过内皮细胞进入脑组织）和细胞旁途径（主要逡逑经紧密连接）。相应地，血脑屏障通透性的变化和调节也分为穿细胞途径和旁细逡逑胞途径两个方面。逡逑紧密连接（Ｔｉｇｈｔ邋Ｊｕｎｃｔｉｏｎ，ＴＪ）位于血管内皮细胞间顶端，是调节血脑屏逡逑障通透性的最主要分子结构，亦是细胞旁途径的主要组成部分。Ｏｃｃｌｕｄｉｎ邋（闭逡逑锁蛋白）和Ｃｌａｕｄｉｎ－５邋（封闭蛋白）是两种紧密连接结构蛋白，对血脑屏障通透逡逑性起重要调节作用［２１’２２］：邋Ｏｃｃｌｕｄｉｎ主要发挥２种功能：①栅栏功能有助于细胞逡逑极性形成，阻止不同功能区之间的物质互相扩散；②屏障调节功能可以调节小逡逑分子运输，维持组织稳态。Ｃｌａｕｄｉｎ－５对维持紧密连接的完整性及正常生理功能逡逑起着重要作用，是脑血管内皮细胞紧密连接中的特异性蛋白。研宄表明，大脑逡逑中动脉线栓法导致局灶性脑缺血后
盐酸戊乙奎醚（Ｐｅｎｅｈｙｃｌｉｄｉｎｅ邋Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ，ＰＨＣ）又名长托宁，是一种新逡逑型抗胆碱药，化学结构为３－（邋２－羟基－２－环戊基－２－苯基乙氧基）奎宁环烷，结构式见逡逑图２［３７］。ＰＨＣ对Ｍ受体亚型有高度选择性，迄今为止，己在有机磷农药中毒及肾、逡逑胆绞痛的治疗中得到广泛应用Ｍ受体是毒蕈碱型受体（ｍｕｓｃａｒｉｎｉｃ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ）逡逑的简称。Ｍ受体共分为三个亚型，其中型主要分布于脑和胃黏膜，Ｍ２亚型逡逑主要分布在神经元突触前膜和心脏，Ｍ３亚型受体则主要分布在腺体和平滑肌。逡逑ＰＨＣ对Ｍ２受体无作用，主要作用于ＭｊｎＭ３受体，因此，ＰＨＣ可缓解平滑肌痉挛、逡逑改善微循环而无心率加快等副作用。而且ＰＨＣ的半衰期远大于阿托品，达阿托品逡逑的２．５倍［３９］，解痉效果也比阿托品强［４（）］，从而可提供更长时间更强效的微循环改逡逑善作用。因其用药次数减少，可节约医疗资源、增加易操作性及依从性。多项逡逑研宄证明［４１４４］，对于大鼠脑缺血－再灌注损伤和脑水肿，ＰＨＣ有明显保护作用，逡逑但其具体作用机制尚未完全明确。另有研究表明
逑障中上述分子的病理表达，起到保护创伤性休克后血脑屏障通透性的作用。逡逑ＮＦ－ｋＢ通路示意图及本研究立题假设见图３，旨在探讨创伤性休克早期血脑屏障逡逑通透性动态变化规律、ＮＦ－ｋＢ信号通路对其的调控作用以及ＰＨＣ对其的保护作用逡逑及分子机制。为临床应用ＰＨＣ来防治创伤性休克继发脑损伤及ＭＯＤＳ提供进一步逡逑的理论依据。逡逑创伤和休克逡逑逦逦逡逑ｆ逡逑胞d阱澹у五义希苠危校龋缅逡种棋义辖猓跎馘义县咤澹桑耍耍㈠危危疲耄洛宥坼义襄危掊翁迦胂赴隋义希掊味盏枷掠五义匣颍桑呕虻腻义希危疲妫洛巫煎义希郑眨忮五五五五义襄五义希ュ危桑耄路核鼗暗鞍酌附到猓头牛危疲耄洛义襄五五义习隋危掊义希
本文编号：2792097
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