肠炎沙门氏菌耐药特征及PFGE分子分型研究

发布时间：2020-09-04 15:57

　　 研究目的:1.通过对2012～2015年江苏省人源、食品源以及动物源肠炎沙门氏菌的耐药情况测试,耐药谱分析,研究肠炎沙门氏菌的耐药特点。为指导临床医生合理选择使用抗生素,同时为有效预防沙门氏菌感染以及控制疾病流行提供科学参考。2.根据肠炎沙门氏菌β-内酰胺类、氨基糖苷类、氯霉素类、磺胺类/甲氧苄胺类、四环素类以及喹诺酮/氟喹诺酮类耐药表型以及相关耐药基因检测结果,了解耐药基因在肠炎沙门氏菌中的分布情况以及耐药表型和基因型之间的关系,分析探索多重耐药性肠炎沙门氏菌产生的原因。3.利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对肠炎沙门氏菌进行分子分型及溯源分析,比较不同来源肠炎沙门氏菌同源性,确定江苏省肠炎沙门氏菌主要分子型别以及分子型别与耐药表型及基因型间关系,为监测肠炎沙门氏菌流行及疾病暴发溯源提供参考。研究方法:1.参照GB4789.4-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》中方法,对2012～2015年江苏省地区动物源(鸡、猪专项)基线调查专项、食源性疾病哨点监测腹泻病人及食品行业从业人员健康体检共93株肠炎沙门氏菌分离株进行血清型鉴定;参照美国临床实验室标准化研究所CLSI标准推荐的Kirby-Bauer(K-B)纸片法对肠炎沙门氏菌进行β-内酰胺类(氨苄西林、阿莫西林/克拉维素、头孢西丁、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢曲松、头孢吡肟)、氨基糖苷类(链霉素、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星)、喹诺酮类(萘啶酸、环丙沙星)、磺胺类(磺胺甲恶唑)、氯霉素类(氯霉素)、四环素类(四环素),共计16种抗生素敏感性试验。2.通过PCR方法检测肠炎沙门氏菌分离株β-内酰胺类(blaTEM-1-like、blaCTX-M、blaOXA-1-like、blaCMY-2、blaPSE-1、blaSHV)、氨基糖苷类(aadA1-like、aadA2、aadB、cC4、aac(6')-1b、氯霉素类(catA1、cmlA1、floR)、甲氧苄胺类(dfrA1-like、dfrA12、dfrA17)、磺胺类(sul1、sul2、sul3)、四环素类(tet(A)、tet(G)、tet(B)、tet(C))以及喹诺酮/氟喹诺酮类(qnrA、qnrB、qnrS、qnrC、qnrD)共29种耐药基因携带情况。3.参照国际Pu1seNet沙门氏菌脉冲场凝胶电泳分子分型标准操作方案,对所有受试肠炎沙门氏菌进行分子分型。选择限制性内切酶XbaI消化菌株基因组,经脉冲场凝胶电泳后,使用凝胶成像系统获取电泳图像,通过国家致病菌识别网软件对图像条带进行处理、分析。研究结果:1.耐药表型结果:肠炎沙门氏菌对萘啶酸、氨苄西林、链霉素以及头孢哌酮耐药率较高,其耐药率分别为 93.55%(87/93)、74.19%(69/93)、65.59%(61/93)和 51.61%(48/93)。93株肠炎沙门氏菌对16种抗生素共形成22种耐药谱,菌株主要表现对4～5种抗生素耐药;部分菌株形成固定耐药谱型:AMP-CFP-STR-NA-TE(21/93)、AMP-STR-NA-TE(15/93)、AMP-CFP-STR-NA(10/93),对3类及3类以上药物耐药即MDR多重耐药菌株比例为75.27%(70/93)。2.耐药基因PCR检测结果:sul2和sul3基因携带率最高,超过80%,其次为blaTEM-1-like、tet(A)、tet(G)、blaCTX-M和aac(6')-1b基因,检出率分别为 75.27%、40.86%、35.48%、12.90%和9.8%。sul1基因与磺胺类耐药表型符合率为93.55%,blaTEM-1-like基因与青霉素类耐药表型符合率为91.40%,tet(A)、tet(G)与四环素耐药表型符合率为66.67%。3.PFGE分型结果:PFGE聚类分析可分为A和B两个大聚类,共形成PFGE-XbaⅠ 28个型别。B19和B23为主要PFGE型别,来源于不同地区,且多数菌株来源于动物源(鸡源)。B19型别菌株耐药表型主要为AMP-CFP-STR-NA-TE,携带的耐药基因主要为blaTEM-1-like、sul2、sul3以及tet(A);B23型别菌株耐药表型主要为AMP-CFP-NA-TE,携带的耐药基因主要为blaTEM-1-like、sul2、sul3、tet(A)和tet(G)。结论:1.肠炎沙门氏菌普遍对萘啶酸、氨苄西林及链霉素等抗生素耐药,且多重耐药性情况严重,菌株主要以耐4类抗生素为主,最多可对10种抗生素耐药,部分菌株形成固定型别耐药谱型:AMP-CFP-STR-NA-TE、AMP-STR-NA-TE、AMP-CFP-STR-NA。2.耐药基因sul2、sul3、blaTEM-like、tet(A)、tet(G)在肠炎沙门氏菌中携带率较高。耐药基因与耐药表性之间存在一定的关联性;携带全部或部分耐药基因簇blaTEM--1-like/blaCTX-M-tet(A)/tet(G)-sul1-aac(6)-Ib是导致肠炎沙门氏菌多重耐药性王要原因。3.PFGE结果显示肠炎沙门氏菌分化程度不高,优势PFGE型别为B19、B23,其所包含的菌株耐药表型、基因型存在明显相似性。溯源结果表明不同来源(人源、食品源以及动物源)以及不同地区肠炎沙门氏菌可形成相同PFGE带型,表明同一菌株克隆肠炎沙门氏菌,可在不同宿主及不同地区之间流行传播。
【学位单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R446.5
【部分图文】：

图１－１肠炎沙门氏菌菌株多重耐药怙况逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ｍｕｔｉｌｄｒｕｇ邋ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ邋ｏｉ＇Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ邋ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ逡逑

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本文编号：2812305