白介素-6通过抑制自噬诱导血管内皮细胞凋亡

发布时间：2020-10-23 07:13

　　 背景:脓毒症是由于宿主对感染的反应失调而引起的致命性器官功能障碍,其发病机制尚未完全明确。炎症介质和细胞因子作用于血管内皮细胞进而引发内皮细胞的激活、甚至损伤和功能紊乱,在脓毒症的发生与发展过程中起到至关重要的作用。白介素-6(Interleukin-6,IL-6)作为多功能炎性细胞因子,是炎性介质网络的关键成份,探索IL-6对内皮细胞功能和形态的影响及其机制对脓毒症的诊治有着重要意义。细胞凋亡和自噬在维持细胞存活、更新、物质再利用中起着重要作用,参与脓毒症的发生、发展。本研究采用IL-6刺激血管内皮细胞,以研究IL-6对血管内皮细胞凋亡和自噬的影响及其相互作用。目的:探讨IL-6对血管内皮细胞自噬和凋亡的影响以及自噬与凋亡的相互作用。方法:采用5、10、20、50ng/mL IL-6诱导体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)24h。CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡变化,单丹(磺)酰戊二胺(MDC)染色观察细胞嗜酸性自噬泡情况,透射电镜观察细胞超微结构的变化,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白激活型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cleaved-Caspase3)、自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)和(sequestosome 1,SQSTM1)/p62的表达水平。采用IL-6分别联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)或自噬诱导剂雷帕霉素(RAPA)诱导HUVECs,观察细胞增殖、凋亡情况及相关蛋白的表达变化。结果:与对照组相比,IL-6呈浓度依赖性降低HUVECs的增殖活性和LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ的表达(P0.05),增加细胞凋亡和cleaved-Caspase3、p62的表达(P0.05),细胞内自噬泡减少(P0.05),荧光强度明显减弱,且自噬小体明显减少。与IL-6刺激组相比,IL-6联合应用3-MA诱导HUVECs可进一步抑制HUVECs的自噬水平,细胞内自噬泡和自噬小体数目减少(P0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达下降(P0.05),p62 表达增加(P0.05),细胞 cleaved-Caspase3表达和凋亡水平增加(P0.05)。与IL-6刺激组相比,IL-6联合应用RAPA诱导HUVECs可以抑制IL-6诱导的的细胞自噬水平下降,细胞内自噬泡和自噬小体数目增多(P0.05),细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高(P0.05),p62 表达下降(P0.05),cleaved-Caspase3 表达和细胞凋亡水平下降(P0.05)。结论:IL-6可通过抑制自噬增加血管内皮细胞凋亡。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R459.7
【部分图文】：

ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．?＊Ｐ＜?０．０５，?＊＊Ｐ＜?０．０１?ｖｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ；?ＡＰ＜?０．０５?ｖｓ?ＩＬ－６?ｇｒｏｕｐ．?ｎ＝３９?ｘ±ｓ??３．５增强自噬对ＩＬ－６诱导血管内皮细胞凋亡的影晌??在ＩＬ－６刺激ＨＵＶＥＣｓ的同时加入自噬促进剂ＲＡＰＡ，检测结果如图５所示。??与对照组相比，ＲＡＰＡ刺激组ＨＵＶＥＣｓ中嗜酸性自噬泡增加（尸＜０．０５）、??ＬＣ３ＩＩ／ＬＣ３Ｉ表达增力口?ＧＰ＜０＿０５）、ｐ６２表达减少（尸＜０＿０５）；与ＩＬ－６朿嫩组相??比，ＩＬ－６联合ＲＡＰＡ刺激组ＨＵＶＥＣｓ中嗜酸性自噬泡增加（Ｐ＜０．０５?）、ＬＣ３ＩＩ?／?ＬＣ３?Ｉ??表达增加（尸＜０．０５）、ｐ６２表达减少（尸＜０．０５）、ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ?３表达减少（尸??＜０．０５）、细胞凋亡率降低（户＜０．０５）。??０＞??ｓ??ｉ?６０－?￣??ｉ?牛??｜?４０－Ｔ－?￣—??导?＊??°?２０－?丨丁??势??〇??芎?〇Ｕ???????Ｌ??８５?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＩＬ－６?ＲＡＰＡ?ＩＬ－６＋ＲＡＰＡ??Ａ??２０??
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本文编号：2852709