LINC01882调节T细胞功能参与aGVHD发病的研究

发布时间：2020-10-25 08:25

　　 目的:异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是根治恶性血液系统疾病的有效途径,然而急性移植物抗宿主病(aGVHD)是移植后主要并发症,限制了其广泛的临床应用。aGVHD的发生过程和T细胞息息相关,研究表明非编码RNA-miRNA在aGVHD的发生中发挥着重要的作用。我们的前期体内外实验均证实了miR-155可促进T细胞向Th1、Th9及Th17细胞分化而抑制向Th2及Treg细胞分化,参与aGVHD的启动和进展。而近些年,众多研究表明另一类非编码RNA-lncRNA在调控T细胞的分化过程中也发挥着必不可少的作用,但目前尚无有关lncRNA在aGVHD发生中扮演角色的研究报道。LINC01882是一种新发现的lncRNA,主要在T细胞中表达,在T细胞的激活中发挥重要作用。为了探索lncRNA能否成为诊断和预测aGVHD的高敏感性及特异性的非侵入性生物学指标,本实验对LINC01882的功能展开了研究。方法:1、qRT-PCR检测PHA或anti-CD3/CD28活化的人外周血CD3~+T细胞及对照组LINC01882、ZEB1、PDE7A表达水平变化。2、磁珠分选未发生aGVHD与发生aGVHD异基因造血干细胞移植患者外周血CD3~+T细胞,qRT-PCR检测两组患者外周血CD3~+T细胞中LINC01882表达水平。3、构建LINC01882慢病毒过表达载体及其阴性对照,分别转染活化的人外周血CD3~+T细胞,qRT-PCR检测LINC01882上调效率,同时qRT-PCR检测两组细胞中ZEB1、PDE7A、miR-155表达水平变化,CCK8检测两组细胞增殖活性差异,流式细胞术检测两组T细胞亚群变化。4、利用lipo3000将LINC01882 siRNA及其阴性对照转染人外周血CD3~+T细胞48小时,qRT-PCR检测LINC01882敲低效率,同时检测两组细胞中ZEB1、PDE7A、miR-155表达水平变化。结果:1、与未活化对照组相比,PHA或anti-CD3/CD28活化的人外周血CD3~+T细胞LINC01882、ZEB1、PDE7A表达水平均明显下调。2、在异基因造血干细胞移植患者外周血CD3~+T细胞标本中,与未发生aGVHD患者相比,aGVHD患者LINC01882表达水平下调。3、与对照组相比,过表达LINC01882可抑制人外周血CD3~+T细胞增殖,下调CD8~+T细胞比例。4、与对照组相比,过表达LINC01882可上调人外周血CD3~+T细胞miR-155表达水平(ZEB1、PDE7A表达水平变化无统计学意义)。5、与对照组相比,敲低LINC01882可下调人外周血CD3~+T细胞中miR-155、ZEB1、PDE7A表达水平。结论:1、LINC01882参与T细胞的活化,调控ZEB1、PDE7A表达。2、LINC01882参与aGVHD的发生。3、LINC01882可调控T细胞增殖及其亚群分化。4、LINC01882可正性调控T细胞中miR-155表达。综上所述:LINC01882参与T细胞活化,调控T细胞的增殖与分化,参与aGVHD的发生。但对于LINC01882的功能研究仍然较少,仍需进一步研究。
【学位单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R457.7
【部分图文】：

实验结果82 在活化的人外周血 CD3+T 细胞中表达明显下调：珠分选获得人外周血 CD3+T 细胞，实验组加入 PHA 5μg/m入相同体积溶剂的阴性对照组。实验组与对照组分别设为显微镜下观察，与 NC 组相比，PHA 组形态由小而圆的规则的细胞，且细胞明显成簇聚团生长。通过 qRT-PCR 检测 表达水平，与 NC 组相比，PHA 组 LINC01882 表达下调约.0001，图 1A 示。anti-CD3 10μg/ml 孵育 96 孔板，与 anti-CD外周血 CD3+T 细胞 48h，同时设置加入相同体积溶剂的对组分别设为 anti-CD3/CD28 组与 NC 组。普通显微镜28 组与 NC 组明显不同，且发现其细胞形态变化与 PHA 组CR检测两组细胞LINC01882表达水平，与NC组相比，anti-82 表达下调约 74.0%(±5.2%)，P<0.0001，图 1B 示。

华 中 科 技 大 学 硕 士 学通过磁珠分选获得人外周血 CD3+T 细胞，实验组加入同时设置加入相同体积溶剂的对照组。实验组与对照组组。通过 qRT-PCR 检测两组细胞 ZEB1、PDE7A 表达水组 ZEB1 表达下调约 79.2%（±2.2%），P<0.001，PDE7A1.8%），P<0.0001，如图 2A、C 示。anti-CD3 10μg/ml 孵育2μg/ml 共同刺激人外周血 CD3+T 细胞 48h，同时设置加组。实验组与对照组分别设为 anti-CD3/CD28 组与 NC 组anti-CD3/CD28 组 ZEB1 下调约 85.7%（±2.4%），P<0.00（±3.7%），P<0.0001 如图 2B、D 示。

技 大 学 硕 士 学 T 细胞在 anti-CD3/CD28 刺激 48h 后 ZE因表达水平，β-actin 作为内部标准化胞移植后发生 aGVHD 患者标本中 LINC0因造血干细胞移植患者新鲜外周血标本发生 aGVHD 患者，分别设为 non-aGV本中 CD3+T 细胞。qRT-PCR 检测两组 L比，aGVHD 组患者标本中 LINC01882 果如图 3 所示：
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本文编号：2855700