抗感染治疗对脓毒症大鼠肠道微生态的影响研究

发布时间：2020-10-26 17:23

　　 目的:探讨研究抗感染治疗及抗感染联合免疫调节治疗对脓毒症大鼠肠道微生态的影响,揭示抗感染治疗及抗感染联合免疫调节治疗脓毒症的疗效机理,以及对脓毒症大鼠肠道微生态影响的机制,为阐明脓毒症的发生发展机制提供理论依据,为探索脓毒症诊断和治疗方案的优化奠定基础。方法:随机将66只150-250 g SD雄性大鼠分成5组(假手术组,脓毒症组,环磷酰胺组,亚胺培南组,亚胺培南联合环磷酰胺组)。采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture[CLP])复制脓毒症模型,假手术组大鼠进行同样的手术操作,但不进行穿孔及结扎。另随机选取50只大鼠给予同样的造模方式及分组(每组10只大鼠),进行各组大鼠生存分析研究。判断和鉴定脓毒症模型复制成功后,通过腹腔注射亚胺培南(120 mg/kg)及环磷酰胺(10 mg/kg)给予干预治疗,每隔12小时给予一次药物治疗;生存分析动物连续给予干预治疗7日,记录各组大鼠生存时间及数量并绘制7天生存曲线,定量分析各组生存数据;肠道屏障功能分析及机制探讨,选取给予治疗后24小时时间节点。通过荧光示踪法检测各组大鼠血清中FD-70浓度,定量分析各组大鼠肠道通透性。通过HE组织切片,观察各组大鼠肠道组织损伤,以及TUNEL法,定性分析各组大鼠肠道黏膜细胞凋亡,进一步探讨分析各组大鼠肠道跨细胞通透性水平。通过蛋白印迹技术(Western-blot技术),检测各组大鼠肠道紧密连接蛋白(occludin)表达水平,探讨分析各组大鼠细胞间通透性改变。通过酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay[ELISA])法检测各组大鼠血清细胞因子(interleukin[IL]-6,IL-10,tumor necrosis factor[TNF]-α)表达水平,分析细胞因子对各组大鼠肠道通透性的影响。结果:(1)成功复制脓毒症模型,脓毒症大鼠7天生存率为18.18%。亚胺培南组脓毒症大鼠生存率明显提高(50%vs 18.18%),而联合治疗组脓毒症大鼠生存率进一步改善(70%vs 50%)。(2)通过检测血浆中FD-70表达量定量分析肠道通透性的改变,脓毒症大鼠肠道通透性明显增强,亚胺培南治疗组及联合治疗组脓毒症大鼠通透性明显改善,而亚胺培南组与联合治疗组相比,联合治疗组脓毒症大鼠肠道通透性高于亚胺培南组。(3)进一步探讨联合治疗组脓毒症大鼠肠道通透性增加的可能机制,采用HE组织切片定性检测各组大鼠肠道组织的病理损伤,以及TUNEL法定性检测各组大鼠肠道黏膜细胞凋亡分析肠道跨细胞通透性。结果显示,脓毒症大鼠出现明显的肠道组织损伤及细胞凋亡,亚胺培南组及联合治疗组脓毒症大鼠肠道组织损伤及凋亡明显改善,亚胺培南组与联合治疗治疗组相比,脓毒症大鼠肠道组织病理损伤及肠道细胞凋亡未见明显差别。(4)定量检测了肠道紧密连接蛋白(occludin)表达水平用于进一步探讨分析不同治疗方式对各组大鼠细胞旁通透性的影响。结果显示,脓毒症大鼠肠道组织occludin蛋白表达减少,亚胺培南及联合治疗组脓毒症大鼠肠道组织occludin表达量增加,而联合治疗组脓毒症大鼠肠道组织occludin蛋白表达量明显低于亚胺培南治疗组。(5)进一步探讨细胞因子对各组大鼠肠道通透性的影响。结果显示脓毒症大鼠血清IL-6,IL-10,TNF-α表达水平均是明显增强,亚胺培南组脓毒症大鼠血清IL-6,IL-10,TNF-α表达水平均是明显减弱,而联合治疗组脓毒症大鼠血清IL-6,IL-10表达水平进一步减弱,而TNF-α表达增强。结论:(1)亚胺培南治疗可改善脓毒症大鼠的生存率;亚胺培南联合小剂量环磷酰胺治疗,可明显提高脓毒症大鼠生存率。(2)亚胺培南治疗对脓毒症大鼠肠道黏膜屏障损伤有保护作用。亚胺培南联合小剂量环磷酰胺治疗,可加重脓毒症大鼠肠道黏膜屏障功能障碍,其可能机制是IL-10因子及occludin蛋白表达减弱。
【学位单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R459.7
【部分图文】：

图 1.各组大鼠生存曲线。注：##代表与假手术组相比 p<0.05 ；**代表与脓毒症组相比 p<0.05。*代表与亚胺培南组相比 p<0.05。Sham 代表假手术组，CLP 代表脓毒症组，CTX 代表环磷酰胺组，Imipenem 代表亚胺培南组亚胺培南组，Imipenem+CTX 代表亚胺培南+环磷酰胺组。4.3 各组大鼠肠道通透性检测通过荧光酶标仪检测各组大鼠血清中 FD-70 浓度，检测肠道通透性改变。脓毒症大鼠肠道通透性明显上升（p<0.05）。亚胺培南组与联合治疗组，通透性得到明显改善（p<0.05），而联合治疗组通透性高于亚胺培南治疗组（p<0.05）。单用环磷酰胺治疗，脓毒症大鼠肠道通透性高于单用亚胺培南治疗及联合治疗（p<0.05）。表格 1. 各组大鼠血清 FD-70 浓度定量分析分组 均数±标准差假手术组 0.4092±0.00647#

鼠血清 FD-70 浓度。#代表与假手术组相比 p<0.05 ；**代表与脓毒症组相南组相比；Sham 代表假手术组，CLP 代表脓毒症组，CTX 代表环磷酰胺组亚胺培南组，Imipenem+CTX 代表亚胺培南+环磷酰胺组。大鼠肠道病理检测E 染色检测各组脓毒症大鼠肠道黏膜损伤。脓毒症造模组可见明胞渗出，肠道绒毛断裂，以及肠道腺体消失。而亚胺培南组与联损伤得到改善，炎症细胞渗出减少，肠道绒毛断裂减少，可见完毒症大鼠肠道组织切片可见完整肠道组织，但炎症反应明显加重润，并出现散在出血点。

图 5 各组大鼠 occludin 蛋白表达量定性分析。#代表与假手术组比较 p<0.05 ；*代表与脓毒症组比较 p<0.05；Sham 和 A 代表假手术组，CLP 和 B 代表脓毒症组，CTX 和 C 代表环磷酰胺组，Imipenem和 D 代表亚胺培南组亚胺培南组，Imipenem+CTX 和 E 代表亚胺培南+环磷酰胺组；OD ratio 代表occludin/β-actin 相对比值。CLP, cecal ligation and puncture. CTX, cyclophosphamide。4.7 各组大鼠血清细胞因子表达4.7.1 各组大鼠血清 IL-6 因子表达水平脓毒症大鼠血清 IL-6 因子表达水平明显增强（p<0.05）。与脓毒症大鼠相比较，环磷酰胺组、亚胺培南组以及联合治疗组大鼠血清 IL-6 因子表达水平明显减弱（p<0.05）。亚胺培南组与联合治疗组相比，联合治疗组 IL-6 表达水平明显减弱（p<0.05）。环磷酰胺组脓毒症大鼠血清 IL-6 表达水平明显弱于亚胺培南组与联合治疗组脓毒症大鼠血清IL-6 表达水平（p<0.05）。表格 4. 各组大鼠血清 IL-6 表达量定量分析
【参考文献】

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本文编号：2857284