杜氏肌营养不良症和基底细胞痣综合征的基因检测与分析

发布时间：2020-10-28 04:34

　　 杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)是一种X染色体隐性遗传疾病,以神经肌肉退行性变为特征。该病通常由抗肌萎缩蛋白基因突变引起,并由此导致抗肌萎缩蛋白功能缺失。DMD病情严重,预后不良,一般20岁左右死于呼吸衰竭或心力衰竭。DMD在男性新生儿中的发病率为1/3500,其致病基因为抗肌萎缩蛋白基因(dystrophy,DMD基因)。DMD主要的突变类型为基因部分缺失或重复,约占全部突变类型的60%。由于DMD目前尚无有效治疗方法,DMD致病基因的检测、产前诊断及遗传咨询是预防DMD的关键措施。本研究收集到一例肌营养不良家系,应用二代测序,在先证者的DMD基因51号外显子剪接位点附近发现了一个新发致病突变C.7310-11AG,家系内另一名患者同样有此变异,两名患者的母亲为该变异的杂合携带者。通过RT-PCR实验并结合sanger测序,发现新的剪切位点变异改变了DMD的剪接,使10bp内含子碱基插入了mRNA中。DMD的mRNA插入10bp碱基后,经分析会形成截短蛋白,可能导致蛋白产物的活性降低,从而导致杜氏肌营养不良症。基底细胞痣综合征(Basal cell nevus syndrome,BCNS)又称Gorlin-Goltz综合征(Gorlin-Goltz syndrome,GGS),是一种罕见的常染色体显性遗传性疾病。目前主要的致病基因为PTCH1,也有少数报道认为PTCH2、SUFU基因与BCNS有关,尤其是伴有成神经管细胞瘤或脑膜瘤的BCNS。BCNS的临床表现包括多个器官的异常,主要有颅面异常、神经系统异常、骨骼异常、手足异常等。本研究收集到一例BCNS家系,然后用sanger测序检测PTCH1基因。在先证者PTCH1基因上2号外显子发现一新发的剪切位点变异C.7310-11AG,家系内另一患者也有相同变异。通过RT-PCR实验和sanger测序,发现剪切位点变异使PTCH1基因2号外显子跳读。综上,这一新发变异是BCNS的致病突变。
【学位单位】：湖南理工学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R746.2;R596;R440
【部分图文】：

学院硕士学位论文 第2章 一例杜氏肌营养不良症的基因检测与分小孩比较智力尚可。步态异常，不能跳跃，跑步时常跌倒，上厕所不能单独起立，腓肠肌假性肥大，四肢腱反射稍迟钝，扁平足；血液检测显示肌酸肌酶（CreaCK）升高。先证者弟弟（Ⅳ-8），两岁半，有相同症状，程度较轻，血液检测显高。先证者母亲（Ⅲ-3）表型正常，但是血液检测显示 CK 升高。家系内其他成员，第二代成员中有两名已去世的男性，生前同样表现出肌营养不良的症状。

先证者弟弟（Ⅳ-8），两岁半，有相同症状，程度较轻，血母亲（Ⅲ-3）表型正常，但是血液检测显示 CK 升高。家系成员中有两名已去世的男性，生前同样表现出肌营养不良的症图 2-1 杜氏肌营养不良家系图，图中箭头所指的为先证者

图 2-3 PCR 反应条件 PCR 产物鉴定制备 1%琼脂糖凝胶：称取琼脂糖粉末 0.5 g，加入 1×TBE 缓冲液至 30 mL，在加热溶解；加入核酸染料 5 μL，振荡摇晃均匀；趁胶微热不烫手时，将胶倒入制胶膜，插入梳子，避免气泡产生；待胶完全冷却凝固后，将胶放入电泳槽，向电泳槽内加入 1×TBE 缓冲液直至漫在点样孔进行点样，DNA maker 溶液和 PCR 扩增产物均为 3 μL。设置电压为 150 V，时间为 20 分钟，进行凝胶电泳。在紫外分析仪中观察凝胶电泳结果，选择带型单一及浓度较髙的扩增产物进行测 PCR 产物测序与分析取凝胶电泳结果理想的 PCR 产物送至铂尚生物技术有限公司进行 sanger 测序，测
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本文编号：2859596