乳酸菌对脓毒症大鼠肠道屏障功能的保护作用

发布时间：2020-10-30 18:48

　　 背景:近年认为肠道屏障功能损害是脓毒症时多器官衰竭发生的始动因素。肠上皮细胞紧密连接是肠黏膜机械屏障的组成部分,一旦紧密连接受损,肠上皮细胞间的通透性增加,细菌和内毒素等就可通过肠道屏障进入体循环,与多种疾病的发生发展相关。紧密连接可以用来评价肠粘膜屏障的功能。目的:用脂多糖(LPS)诱导脓毒症大鼠模型,研究植物乳酸菌对脓毒症大鼠的回肠组织紧密连接蛋白(Claudin-1、Occludin)的表达影响,进而探究植物乳酸菌是否对脓毒症大鼠肠道屏障功能起到保护作用。方法:90只清洁级健康雄性SD大鼠随机分为对照组(C组)、植物乳酸菌预处理组(LP组)、脓毒症组(LPS组)、脓毒症加乳酸菌干预组(LPS+LP组)、乳酸菌预处理加脓毒症组(LP+LPS组)。采用LPS尾静脉注射诱导脓毒症大鼠模型,LPS+LP组在尾静脉注射LPS 1h后灌胃植物乳酸菌一次。LP+LPS组连续灌胃3天后尾静脉注射LPS一次。处理后分别从6h、12h、24h从实验组取6只大鼠,采用透射电镜观察紧密连接超微结构,应用Western Blot检测Claudin-1、Occludin蛋白的表达。采用免疫组织化学法、免疫荧光法检测回肠组织Claudin-1、Occludin蛋白表达情况。结果:1.实验动物干预情况:C组大鼠灌胃后无影响,生活状态良好,毛发有光泽,无异常活动反应,对外界声音、刺激反应敏感,无死亡;LP组(乳酸菌预处理组)大鼠灌胃处理后与C组无大区别,活动如常,均存活;LPS组(脓毒症组)大鼠尾静脉注射LPS后,活动度大幅度减少,少食或不进食进水。毛发无光泽,拉稀便,倦怠,呼吸急促,对外界刺激反应迟钝,甚至死亡;LPS+LP组、LP+LPS组也出现相似症状。2.透射电镜观察紧密连接超微结构:在C组、LP组紧密连接结构正常,且缝隙连接无断开,微绒毛排列整齐,细胞间隙无增大;均未见异常紧密连接蛋白结构。LPS组可见多处异常紧密连接结构,如不连续,肿胀等,且伴有缝隙连接出现不连续现象,微绒毛缺如,提示脓毒症对紧密连接影响比较大。LP+LPS组、LP+LPS组也可见异常紧密连接结构,但较LPS组少。3.小肠组织Claudin-1蛋白表达:Claudin-1在6h、12h、24h的LP组较C组无差异,统计学无意义。C组在6h、12h、24h均高于LPS组(P0.01)。LP+LPS组在6h、12h、24h均高于LPS组(P0.05)。LPS+LP组在6h、24h高于LPS组(P0.05),在12h二者无差异。4.小肠组织Occludin蛋白表达:Occludin在6h、12h、24h的LP组较对照组(C组)无差异,统计学无意义。LPS组与C组比较,在6h时用统计学分析无差异,12h、24h中C组高于LPS组(P0.01)。LP+LPS组较LPS组,在6h时无差异,在12h时高于LPS组(P0.05),24h时高于LPS组(P0.01)。LP+LPS组较LPS组,6h、12h无差异,24h时高于LPS组(P0.05)。5.小肠组织Claudin-1、Occludin蛋白免疫组化表达:C组、LP组在6h、12h、24h呈强棕色阳性颗粒沿肠粘膜上皮细胞膜顶端分布,均呈连续性分布。LP+LPS组沿肠粘膜上皮分布连续性较好,并未有明显中断。LPS+LP组、LPS组棕色阳性颗粒可见明显减少,颜色弱化,并有多处中断。6.小肠组织Claudin-1、Occludin蛋白免疫荧光表达:Claudin-1、Occludin蛋白在6h、12h、24h中C组、LP组可见该蛋白呈线性致密颗粒分布在回肠黏膜上皮,未中断,荧光强。LP+LPS组紧密连接蛋白大部分也能保持完整,但仍能发现一些断裂分开现象。LPS+LP组与LPS组的荧光强度差异不大,两组存在较多的断裂现象,且荧光弱。结论:通过尾静脉注射脂多糖可成功诱导脓毒症大鼠模型。植物乳酸菌可上调Claudin-1、Occludin蛋白的表达,对脓毒症大鼠肠道屏障功能具有保护作用。
【学位单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R459.7
【部分图文】：

对外界声音、刺激反应敏感，无死亡；LP 组（乳酸菌预处理组）大鼠灌胃处理后与 C 组无区别，活动如常，均存活；LPS 组（脓毒症组），大鼠基本不进食进水，拉稀便，活动度大幅度减少，毛发无光泽，呼吸急促，对外界刺激反应迟钝，甚至死亡；LPS+LP 组（脓毒症加乳酸菌干预组）也出现相似症状，活动量减少，拉稀便，对外界刺激反应弱，但死亡数比 LPS 组少；LP+LPS 组（乳酸菌预处理加脓毒症组）活动度相较于 LPS 稍好些，拉稀便，存活率较 LPS 组和 LPS+LP 组高。本实验共使用 113 只大鼠，造模 24h 内，如图 1.1 所示，C 组，LP 组均无死亡，均为 100%。LPS 组在 6 小时内的生存率为 100%（6/6）,12 小时为 50%（3/6）,24 小时生存率为 16.7%（1/6），LP+LPS 组在 6 小时内生存率为 83.3%（5/6），在 12 小时内生存率为 50%（3/6），24 小时生存率为 50%（3/6），LPS+LP组在 6 小时内生存率为 100%（6/6），12 小时生存率为 16.7%（1/6），24 小时生存率为 50%（3/6）。最后 90 只大鼠获得完整数据。

1.2 脓毒症大鼠剖腹探查情况大鼠在注射 LPS 后分别于 6h、12h、24h 剖腹探查（如图 1.2 所示），可闻及明显刺鼻气味，腹腔内可见明显血性腹水，有多处器官相互黏连，且在大部分大鼠肝脏表面发现许多小脓点，肠管明显胀气，多有黄色粘液便等改变。C组、LP 组剖腹探查则未有如上述异常表现。综上，可认为本实验该方法通过成功建立脓毒症大鼠模型。

构完好；LPS 组电镜下可见多处异常紧密连接结构，如不连续，肿胀等，图 2 C白色箭头所示两处紧密连接出现不连续现象，微绒毛缺如。综上，提示脓毒症对大鼠回肠组织的紧密连接形态结构有影响。
【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 Christoph G Dietrich;Tanja Kottmann;Manuela Alavi;;Commercially available probiotic drinks containing Lactobacillus casei DN-114001 reduce antibiotic-associated diarrhea[J];World Journal of Gastroenterology;2014年42期

2 Stelios F Assimakopoulos;Ismini Papageorgiou;Aristidis Charonis;;Enterocytes’tight junctions:From molecules to diseases[J];World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology;2011年06期

本文编号：2862861