细胞应激诱导剂毒胡萝卜素预适应保护脓毒症的研究

发布时间：2020-10-30 19:29

　　 背景脓毒症(sepsis)是由感染引起的全身性炎症反应,表现为宿主反应失调导致的危及生命的器官功能障碍。脓毒症的病情凶险,临床致死率高,近几年,尽管抗感染治疗技术和器官功能支持治疗有一定的发展,但脓毒症总的病死率仍达30%以上。目前脓毒症的治疗主要针对免疫调控和抗感染,但由于脓毒症患者免疫炎症反应的复杂性和明显的个体差异性,以往针对抗炎治疗的临床试验均未能显示对临床预后有明显的改善作用。因此,寻找有效治疗和预防脓毒症发生发展的新靶点具有重要意义。毒胡萝卜素(Thapsigargin,TG)是内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激的诱导物。以往的研究表明,用TG预适应对各种应激损伤具有保护作用。迄今为止,还没有关于TG预适应对脓毒症影响的报道。目的毒胡萝卜素在脓毒症的发展过程中可能是既有损伤作用又有保护作用的双刃剑。以往研究发现毒胡萝卜素适度预适应性干预能够在不同的疾病模型中起到保护作用。本课题拟研究毒胡萝卜素适度预适应性干预是否能减轻脓毒症造成的损伤。方法在整体水平,分别使用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠脓毒症模型和腹腔盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)方式诱导脓毒症模型,预适应性应用毒胡萝卜素于LPS处理前15小时腹腔注射,观察毒胡萝卜素预适应对生存率和器官功能的影响。用western blot、real-time PCR、ELISA在整体水平和细胞水平研究内质网应激预适应对炎症反应的影响及调节炎症反应的生物学机制。结果毒胡萝卜素预适应性干预在昆明小鼠脓毒症模型和C57/BL6J小鼠脓毒症模型中能明显改善生存率。与对照比,在C57/BL6J小鼠脓毒症模型中经预适应处理的小鼠注射LPS后肺脏病理损伤明显减轻,血清谷草转氨酶,谷丙转氨酶以及乳酸脱氢酶水平明显降低。同样,与脓毒症组相比,毒胡萝卜素预适应降低血清中 interleukin(IL)-6 和 interleukin(IL)-1 β 水平。而肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor α,TNF-α)的水平没有被TG预适应性干预改变。不仅如此,毒胡萝卜素预适应降低脓毒症小鼠血清NO含量、血清中氧化应激的标志物8-iso-prostaglandinF2α水平及脾脏 iNOS 水平。而使用内质网应激抑制剂4-phenylbutyrate(4-PBA)阻断内质网应激后,毒胡萝卜素预适应保护作用依然存在。使用另一种ER应激诱导剂衣霉素预适应性干预后,尽管有较弱的保护作用,但是没有统计学意义。这提示毒胡萝卜素的保护作用不是通过内质网应激介导的。在体外培养的巨噬细胞RAW264.7中,毒胡萝卜素预适应处理对LPS引起的细胞炎症因子IL-6、IL-1β的蛋白表达水平有明显抑制作用,而对炎症因子的mRNA水平作用不明显。毒胡萝卜素预适应处理对LPS刺激引起的nuclear factor(NF)-κB(NF-κB))和c-Jun N-terminal kinase(JNK)通路激活没有明显抑制作用,提示毒胡萝卜素预适应发挥的抗炎症作用不是通过影响LPS受体下游信号通路的功能实现的。另外,我们发现毒胡萝卜素预适应处理降低炎症因子的翻译效率。TG改变炎症因子翻译不是通过调节因子eIF2α的磷酸化水平,毒胡萝卜素对炎症因子翻译效率的作用可能与mTOR通路有关。结论结果提示毒胡萝卜素预适应性干预对脓毒症损伤有保护作用,毒胡萝卜素预适应性干预能够减轻脓毒症所致的炎症反应,其作用机制可能是通过影响炎症因子的蛋白质翻译过程。
【学位单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R459.7
【部分图文】：

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本文编号：2862906