血清外泌体长链非编码RNA HOTAIR在类风湿关节炎患者中的表达检测及临床应用

发布时间：2020-11-06 05:01

　　 研究背景:长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)与多种疾病的发生发展密切相关,已发现在多种肿瘤患者血清中表达量异常增高,已展现出作为一种新型生物标志物的诊断价值。lncRNAs存在于类风湿关节炎(Rheumatoidarthritis,RA)患者滑膜组织、破骨细胞和软骨细胞中,参与了RA的发生发展。但有关lncRNAs在RA患者血清及血清外泌体中表达量的研究尚未见相关报道。目的:研究HOTAIR等3种lncRNAs在RA、系统性红斑狼疮(SLE)和健康对照组血清及血清外泌体中的差异表达,分析lncRNA表达量与RA患者疾病活动度的相关性,探讨血清lncRNA作为RA诊断标志物的可能性,为RA患者的病情判断与活动性监测提供新的实验室指标。方法:收取50例RA疾病组,50例SLE疾病对照组,及60例健康对照组血清,提取血清总RNA,以管家基因GAPDH为内参,利用RT-qPCR方法分析HOTAIR、XIST和H19三种lncRNA在RA疾病组、SLE疾病对照组和健康组三组中的表达情况。用Person相关性分析探讨血清HOTAIR表达量与疾病活动指数(DAS28)的相关性,绘制受试者工作曲线(receiver-operating characteristic,ROC),评估血清lncRNA的RA临床价值。选取同样患者和对照组血清,包括40例RA、50例SLE和60例健康对照血清,分离纯化血清中外泌体,用纳米粒子追踪分析技术和透射电镜技术对外泌体进行表征分析;通过外泌体膜表面标记CD63和CD81,定量检测外泌体数量。用RT-qPCR检测外泌体中HOTAIR、XIST和H19等三种lncRNA的表达水平,比较分析血清lncRNA与外泌体lncRNA的相关关系,应用ROC曲线评估外泌体HOTAIR的潜在诊断价值。结果:一、血清lncRNAs检测结果。RA组与健康对照组相比,血清HOTAIR表达量显著增加(P=0.0005),AUC=0.69,诊断敏感性和诊断特异性分别为58%和78%;RA组与SLE疾病对照组相比,血清HOTAIR表达量显著增加(P=0.004),AUC=0.67,诊断敏感性和诊断特异性分别为56%和78%;XIST在三组间表达水平无明显差异(P0.05);H19在血清中表达量过低而无法检测出。血清中HOTAIR表达值与DAS28评分呈显著正相关关系(P=0.005 r=0.4937),且DAS28评分5.1疾病高度活动组的HOTAIR表达量显著高于5.1DAS2和2.6的疾病中低度活动组(P0.0001);HOTAIR表达量与血清CRP水平之间呈正相关性(r=0.411,P=0.004)与抗CCP抗体、ESR、RF水平未发现有相关关系(P0.05)。二、血清外泌体IncRNAs检测结果。CD81检测结果显示,RA组的胞体浓度明显低于其他各组(P0.05);IncRNAHOTAIR表达水平均显著高于SLE疾病对照组和健康对照组(P=0.0001),RA与正常组及SLE与正常组的ROC曲线下面积分别AUC=0.79、AUC=0.76,敏感性、特异性分别为73%和80%,66%和85%。此外,血清RA与血清外泌体RA相同标本间的HOTAIR表达量之间有相关性(P=0.003,r=0.482);HOTAIR 表达水平与 ESR 水平值相关(=0.008,r=0.481)和DAS28评分值不相关。结论:IncRNA HOTAIR在RA患者血清以及血清外泌体中的表达量显著性升高且在血清中与DAS28评分呈显著正相关关系。HOTAIR在RA患者血清中异常表达,检测其血清表达水平有助于类风湿性关节炎的鉴别诊断以及疾病的活动性判断;血清及其外泌体中的HOTAIR可能是诊断RA和预测疾病活动度潜在的生物标志物。
【学位单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R593.22;R440
【部分图文】：

图１．?１?ＬｎｃＲＮＡ分类??Ｆｉｕｒｅ?１．１?Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＩｎｃＲＮＡ??

３．２?ＲＡ血清ＩｎｃＲＮＡ?ＨＯＴＡＩＲ的表达水平与ＤＡＳ２８评分值的相关性??ＨＯＴＡＩＲ表达量和ＲＡ疾病活动程度即ＤＡＳ２８评分呈显著正相关（尸＝〇？?０??０２２?ｒ＝０．５０６６，图２－２Ａ）。根据ＤＡＳ２８评分系统规定，ＤＡＳ２８彡５．１为疾病高度??活动，５．１＞ＤＡＳ２８＞３．２为疾病中度活动，３．２＞ＤＡＳ２８＞２．６为疾病低度活动，ＤＡＳ??２８＜２．６为病情缓解；我们将３３例ＲＡ患者分为高度活动组（１５例）和中低度活??动组（１８例）两组，结果发现，疾病高度活动组的ＨＯＴＡＩＲ相对表达量比疾病??中低度活动组明显升髙（尸＜０．０００１，图２－２Ｂ）。??Ａ?Ｂ??Ｙ＝－４．１３２＋０．４３５７？Ｘ?８??ｒ＝０．５０６６??１?＾０００２２?剩?Ｒ?ａ??７－?？?？?？?？?为?ｌ?１??Ｑ?？?？?？?？？?０－Ｊ?１?１???３Ｈ?！?１?１?ｙ?Ｓ?？＜〇??０?２?４?６?４＾＇?Ｗ??ＨＭｌＲ＋ａ对表达量?＃?＃??图２－２?ＨＯＴＡＩＲ表达量与ＤＡＳ２８评分的相关性??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＨＯＴＡＩＲ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄ?ＤＡＳ２８?ｓｃｏｒｅ??Ａ：?ＨＯＴＡＩＲ?和?ＤＡＳ２８?评分值相关性分析?Ｐ＝０．００５，?ｒ＝０．５０６６??Ｂ：在ＲＡ高度活动组（ＤＡＳ２８彡５．１）及中低度活动组（５．１＞ＤＡＳ２８＞２．６）血清中ＨＯＴＡＩＲ??表达分析，ａ：?ＰＯ．ＯＯＯｌ??３．４血清ＨＯＴＡＩＲ的表达

进一步分析血清中ＨＯＴＡＩＲ的表达与血清抗ＣＣＰ抗体、ＲＦ、ＣＲＰ、ＥＳＲ??的相关性，结果表明，ＲＡ患者血清ＨＯＴＡＩＲ水平与ＣＲＰ水平呈显著正相关关??系（图２－３；尸＝０．００４），但与抗ＣＣＰ抗体、ＲＦ、ＥＳＲ均无明显相关性（户＞０．０５）??（表?２－７）。??表２－７?ＨＯＴＡＩＲ表达量与类风湿性关节炎相关指标相关性??ＲＡ实验室相关指标?Ｐｅａｒｓｏｎ?ｒ?Ｒ２?Ｐ值??Ａ－ＣＣＰ?．?－０．０７５?０．００５?Ｐ＞０．０５??ＲＦ?－０．０７０?０．００６?例．０５??ＣＲＰ?０．４１１?０．１６８?尸＝０．００４??ＥＳＲ?－０．１７０?０．０３０?ｉ＾Ｏ．０５??６］?Ｐ＝０．００４??．?ｒ＝０．４１１??＾?遂■’?４－?？?＃??〇?？參?鲁??０?２０?４０?６０?８０?１００??ＣＲＰ??图２－３ＨＯＴＡＩＲ表达量与ＣＲＰ相关性??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３ＨＯＴＡＩＲ?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄ?ＣＲＰ?Ｒｅｌｅｖａｎｃｅ??注：血清中ＨＯＴＡＩＲ的表达量与血清ＣＲＰ相关性分析，Ｐ＝０．００４，?ｒ＝０．４１１??３．５ＲＯＣ曲线分析??分别对ＲＡ患者组和ＳＬＥ疾病对照组，ＲＡ患者组和正常对照组ＨＯＴＡＩＲ水??平进行分析，以敏感性（真阳性率）为纵坐标，（１－特异性）（假阳性率）为横??坐标
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本文编号：2872688