两例罕见地中海贫血案例的基因型鉴定及其发生机制研究

发布时间：2020-12-03 03:44

　　研究背景与目的Hb Bart’s胎儿水肿综合征患者（简称“Hb Bart’s水肿胎”）由于缺乏4个α-珠蛋白基因导致 α-珠蛋白合成缺陷,从而导致过多的 γ 与 β 珠蛋白剩余而形成相应的四聚体Hb Bart’s（γ4）和HbH（β4）。γ4和β4对O2的亲和力极高,即使在低氧组织中也不能释放O2,从而造成胎儿宫内严重缺氧,使得胎儿发育受到严重影响并于孕中期出现水肿。没有经过宫内干预而存活的Hb Bart’s水肿胎案例是鲜有报道的。本研究报道了一例无宫内干预而存活的Hb Bart’s水肿胎案例,同时探讨了其存活的原因。该研究将为Hb Bart’s水肿胎的研究提供新视点。材料与方法1.研究对象:先证者是来自广东肇庆的1岁小男孩,被诊断为Hb Bart’s水肿胎。2.实验方法:采集先证者和其家庭成员的新鲜血样进行血液学的表型分析,结合表型分析的结果后进行α-与β-珠蛋白基因簇常见突变检测。通过在α-珠蛋白基因内进行PCR扩增与多重连接探针（MLPA）方法进一步验证基因型,同时进行荧光定量方法分析珠蛋白基因的mRNA的表达水平。提取先证者毛发毛囊以及口腔黏膜的DNA进行α-珠蛋白基因内PCR... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３－１?ａ－珠蛋白基因内片段扩增引物设计图??－１?Ｄｅｓｎ?ｏｒｍｅｒａｍｌｆｒａｍｅｎｉｎ?ａ－ｌｏｉｎｅｎｅ??

长相当于３１孕周），Ａｐｇａｒ评分为１－０－０，羊水量为２０００?ｍＬ，肝脾肿大，全身??水肿，腹肌紧张，出生时死亡。母亲血常规示ＭＣＶ为７２．５?ｆＬ、ＭＣＨ为２０．５?ｐｇ，??父亲血常规示ＭＣＶ为７０．４ｆＬ、ＭＣＨ为２２．０ｐｇ，家系图见图４－１。??／?１?２??Ｈ—ＳＧＡ?Ｉ?ｌ?ａａ??图４－１?Ｈｂ?Ｂａｒｔ＇ｓ水肿胎家系图??Ｆｉｇｕｒｅ?４－１?Ｐｅｄｉｇｒｅｅ?ｏｆ?ＢＨＦＳ?ｐａｔｉｅｎｔｓ??４．２?ＤＮＡ分析结果??４．２．１三种ａ－地贫常见缺失筛查及－ｓｅａ断裂点分析??先证者父母均存在１８２６?ｂｐ和１３０６?ｂｐ的条带，即－－ＳＥＡ携带者；而先证者除??２３??

?开１３０６?ｂｐ位置存在条带，在１８２６?ｂｐ位置也存在微弱的条带，１３０６?ｂｐ位置的??产物送测序分析并无特殊断裂点。见图４－２。??图４－２Ｇａｐ－ＰＣＲ扩增结果??Ｆｉｇｕｒｅ?４－２?Ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?Ｇａｐ－ＰＣＲ??４．２．２?ａ－珠蛋白基因常见点突变分析结果??扩增出来的ａ－珠蛋白基因产物直接测序后跟正常序列比对后发现ＩＩ、１２均??未发现常见６种ａ－珠蛋白基因点突变，即ＣＤ３０?（－ＧＡＧ）、ＣＤ３１?（ＡＧＧ＞ＡＡＧ）、??ＣＤ５９?（ＧＧＯＧＡＣ）、ＣＤ１２２?（ＣＡＯＣＡＧ）（即?ａｗｓ）、ＣＤ１２５?（ＣＴＧ＞ＣＣＧ）（即??ａＱＳ）和?ＣＤ１４２?（ＴＡＡ＞ＣＡＡ）（即?ａｃｓ）。??４．２．３?ａ－珠蛋白基因内扩增结果??先证者的血液、毛发毛囊以及口腔黏膜来源的ＤＮＡ进行ａ－珠蛋白基因内??扩增发现，四对引物扩增的产物均存在较弱的条带，见图４－３。??图４－３先证者的ａ－珠蛋白基因内扩增结果??Ｆｉｇｕｒｅ?４－３?Ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｎ?ａ－ｇｌｏｂｉｎ?ｇｅｎｅ?ｏｆ?ｐｒｏｂａｎｄ??２４??


本文编号：2895938