阳离子聚合物的设计、合成及基因转染性能研究

发布时间：2021-01-08 23:57

　　由于阳离子聚合物基因载体在基因治疗方面具有易制备、稳定性高、免疫反应小、质粒负载能力强的优点,所以在本论文中,我们设计了两种不同的阳离子聚合物型基因载体:含RGD的明胶（Gelatin）-聚乙烯亚胺（PEI）聚合物载体（GT-PEIx）和氨基化修饰的可控规整聚合物基因载体。明胶是一种通过酸法或者碱法水解动物胶原蛋白获得的变性蛋白,明胶具有一段精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（Arg-Gly-Asp）的序列肽（RGD）,RGD可以与癌细胞表面11种整合素特异性结合,增加细胞粘附,提高细胞吸收能力。据此我们在设计聚合物时将明胶修饰,增加一段连接臂再与不同浓度,不同结构,不同分子量的聚乙烯亚胺（PEI）偶联,合成了 64种具有癌细胞靶向的明胶-聚乙烯亚胺聚合物载体。同时探究不同的PEI浓度,PEI的分子结构,PEI的分子量对所合成聚合物转染性能的影响。我们发现GT-PEI11为效果最好的聚合物载体,其在A549,B16F10,COS7,HEPG2中的转染效率分别达到了 74%、58%、66%、29%,与正常细胞COS7,HEPG2相比,在癌细胞A549和B16F10中的转染效率更高,说明RGD序列对... 

【文章来源】：南京理工大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．２?ＧＴ－ＰＥＩＸ聚合物的咁ＮＭＲ??从明胶，ＧＴ－ＦＸ以及ＧＴ－ＰＥＩｘ的红外光谱图（图２．３）中可以看出明?

ＧＴ－ＰＥＩ丨２、ＧＴ－ＰＥＩｉ９、ＧＴ－ＰＥＩ２〇?为例，按?ＧＴ－ＰＥＩｘ／ＤＮＡ?质量比分别为?２０：１、４０：１?和?６０：１??制备转染复合物，并且对它们进行粒径和电势的测定。同时测定ＰＥＩ２５Ｋ／ＤＮＡ为３的??转染复合物的粒径和Ｚｅｔａ电位作为对比。结果如图２．４所示，ＧＴ－ＰＥＩ＾ＧＴ－ＰＥＩｉ＾ＧＴ－ＰＥＩ＾、??ＧＴ－ＰＥｈｏ与质粒ＤＮＡ可以形成粒径在２００?ｎｍ左右的纳米粒子，同时转染复合物带有＋２３??－＋３２ｍＶ的电势，可以看出来ＧＴ－ＰＥＩＸ／ＤＮＡ转染复合物的粒径和电势都是比较合适的，??从电势和粒径分析，ＧＴ－ＰＥＩｘ聚合物应该可以作为基因转染载体。??１９??

．?４．?２．?２琼脂糖凝胶电泳实验??ＧＴ－ＰＥＩＸ聚合物主要是通过静电相互作用和ｐＤＮＡ形成转染复合物，所以我脂糖凝胶电泳实验来测试ＧＴ－ＰＥＩＸ聚合物和ｐＤＮＡ之间的复合能力如图ａ所示，ＧＴ－ＰＥＩＸ聚合物能否有效压缩包裹质粒ＤＮＡ。我们以ＧＴ－ＰＥＩｎ为例，在琼脂


本文编号：2965562