耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ftsZ基因高效反义肽核酸序列筛选及其体外抗菌活性观察

发布时间：2021-01-15 13:23

　　目的筛选出能与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ftsZ基因紧密结合的反义肽核酸序列,评价其体外抗菌活性。方法选用两种计算机软件（Mfold、RNA Structure 5.2）和斑点杂交筛选出最佳反义序列PNA,并连接穿膜肽（cell penetrating peptide,CCPs）形成肽-PNA（peptide-PNA, PPNA）,另设一条与最好序列有3个错配碱基的肽核酸序列作为对照,连接穿肽形成错配的肽肽核酸（scrambled peptide-PNA, Scr PPNA）。将不同浓度的肽肽核酸处理MRSA后,间隔1h测定A600值同时做平板菌落计数,观测其对细菌生长的抑制作用。结果斑点杂交实验结果表明,计算机辅助软件设计的11条反义寡核苷酸序列中,有4条序列显示强弱不同的杂交信号,第3号探针杂交信号最强,而1条正义序列没显示任何信号,PPNA在30和40μmol/L分别具有抑菌作用和杀菌作用,并具有浓度依赖性,而Scr PPNA在高浓度时对细菌也无生长抑制作用,验证了肽核酸的特异性。结论成功的筛选出一条在体外对MRSA的生长有显著的影响的反义肽核酸序列,有望为抗MRSA感染患者提供新... 

【文章来源】：中国抗生素杂志. 2020,45(09)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

fts Z基因PCR扩增产物1%琼脂糖凝胶电泳

以反义肽肽核酸作用的时间为横坐标，纵坐标为MRSA细菌菌落数10的对数值，绘制出折线图(图6)。结果表明，体外斑点杂交实验杂交信号最强的序列PPNA在剂量40μmol/L浓度时处理2h后，MRSA CY-11菌落计数结果，细菌菌落数由105CFU/m L减少到102CFU/m L,6h后细菌被全部杀死，表明PPNA具有快速杀菌效果，在剂量为30μmol/L浓度时对MRSA CY-11显示出抑菌效果，当剂量为20和10μmol/L时，对细菌的生长无抑制作用。而碱基错配的序列Scr PPNA对细菌生长无抑制作用。这项研究结果表明反义肽肽核酸在体外实验具有杀菌作用，并具有特异性。3 讨论

不同浓度的PPNA对细菌的生长抑制作用

【参考文献】：
期刊论文
[1]如何应对多重耐药菌医院感染的严峻挑战[J]. 孟秀娟,吴安华.  中国感染控制杂志. 2019(03)

硕士论文
[1]以金黄色葡萄球菌RNA聚合酶σ70因子为靶标的反义肽核酸的设计、合成及抗MRSA的活性研究[D]. 桑国军.第四军医大学 2012



本文编号：2978944