LOX与p53在肿瘤细胞辐射抗性中的作用机制研究

发布时间：2021-01-24 14:54

　　恶性肿瘤当前威胁着全世界人类的健康,人类的生活质量也因此严重受到影响。近期许多研究发现,LOX在一些恶性肿瘤中表达升高,认为LOX可能参与肿瘤发生发展、粘附性、恶性转化和侵袭。LOX是一种存在于细胞中的铜依赖性氨基酸氧化酶,它作用于细胞外基质胶原和弹性蛋白的赖氨酸残基,并使其产生分子交联。LOX也是一个乏氧反应基因,在乏氧环境中乏氧诱导因子（HIF-1）可增强LOX m RNA和蛋白的活性,从而促进癌细胞侵袭和转移。本研究采用实时荧光定量PCR法分别检测2种结肠癌细胞株、肺癌细胞株、骨肉瘤和肝癌细胞株经4 Gy的X射线照射后,在0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24h时间点LOX基因的表达水平。转染p53 si RNA后,采用RT-PCR和Western Blot检测辐射激活的HCT116 p53wt细胞株中LOX m RNA和蛋白表达;转染p53质粒到H1299细胞株后,检测受照后LOX的蛋白表达水平。利用瞬时转染的实验方法将siLOX转染进入肿瘤细胞,采用实时荧光定量PCR法和Western Blot法验证转染效率;采用克隆形成实验,检测LOX沉默联合电离辐射的HCT116... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

LOX的合成与分泌过程

第 3 章 实验结果第 3 章 实验结果3.1 辐射前后不同 p53 表型肿瘤细胞中 LOX 转录水平的变化利用实时荧光定量 PCR 法分别检测 p53 野生型和 p53 缺失型的结肠癌细胞株、肺癌细胞株、骨肉瘤和肝癌细胞株经 4 Gy 的 X 射线照射后，在 0 h、3 h、6h、9 h、12 h、24 h 时间点 LOX 的 mRNA 表达水平，见图 3.1。结果显示，在p53 野生型细胞(HCT116 p53wt、 H460、U2OS、HepG2)中，给予 X 射线处理后3 h、6 h、9 h、12 h、24 h，LOX 的合成量均显著增加（p < 0.001），但 p53 缺失的细胞(HCT116 p53-/-、H1299、SAOS2、Hep3B)中 LOX mRNA 的表达则与照射前相比没有明显变化。同时我们选取对 X 射线较为敏感的结肠癌细胞 HCT116p53wt 进行了后续研究。

第 3 章 实验结果2 p53 调控辐射诱导的 LOX 的转录和蛋白水平2.1 沉默 p53 抑制辐射诱导的 HCT116 p53wt 细胞中 LOX 的转录水平和蛋平为了初步确认 p53 对 LOX 基因的调控作用，采用 RT-PCR 和 Western 验检测受照的 HCT116 p53wt 细胞中 LOX 基因和蛋白合成量。结果如图示（图 A 为 LOX 转录水平，图 B 为 LOX 蛋白电泳结果），HCT116 p53w中 LOX mRNA 和蛋白水平随着辐照而增加，但转染 p53 siRNA 的细胞中辐导的 LOX 转录和翻译水平受到了明显抑制，即沉默 p53 抑制了 HCT116 p5胞中电离辐射诱导的 LOX mRNA 和蛋白水平。


本文编号：2997439