基于磁性分离和催化发夹组装的外泌体蛋白共表达检测平台的构建及应用
发布时间：2021-02-05 18:43
目的构建基于磁性分离和催化发夹组装信号放大策略的外泌体双膜蛋白共表达检测平台。研究方法1.外泌体纯化及表征:以MDA-MB-231细胞为实验对象。细胞上清液经超速离心机分离得到外泌体。透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope,TEM）拍摄鉴定分析外泌体形态和大小;纳米粒子跟踪分析仪Nanoparticles Tracking Analysis,NTA)检测外泌体粒径和浓度;免疫印迹（Western Blot,WB）检测外泌体蛋白表达情况;外泌体实时荧光定量核酸扩增试验。2.催化发夹组装（Catalytic Hairpin Assembly,CHA）筛选:三组 CHA（CHA1、CHA2、CHA3）根据电泳结果和荧光检测选择最佳。3.基于磁性分离和催化发夹组装的外泌体蛋白共表达检测平台可行性:以MDA-MB-231细胞为实验对象,①超分辨成像技术与免疫印迹实验验证CD63在其外泌体膜上的表达。②多维高清流式细胞分析仪验证外泌体磁珠法富集及效率。③不同浓度外泌体与 AptEpCAM-T 催发链（Aptamer,Apt;Epithelial cell ...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?（ａ）透射电子显微镜，（ｂ）?ＮＴＡ和（ｃ）免疫印迹实验分别表征乳腺癌ＭＤＡ－ＭＢ－２３１??细胞和其来源的外泌体??
各组分纯度好，无多余条带；催化发夹组装（ＣＨＡ１）在催发链Ｔ的作用下可发??生无酶反应且条带明显，但发夹结构Ｈ１、发夹结构Ｈ２在没有催发链Ｔ时，两者??也发生反应且条带明显，说明发夹结构不稳定。电泳结果见图２－２。??ｂｐ??５?〇?〇??蠢ｓ袋麗寒＾??图２－２?ＣＩＩＡｌ电泳验证实验??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＣＨＡ１??催化发夹组装（ＣＨＡ２）各组分纯度好，无多余条带；在催发链Ｔ的作用下??可发生无酶反应且条带明显；发夹结构Ｈ１、发夹结构Ｈ２在没有催发链Ｔ时，两??者发生反应不明显（条带不明显），说明发夹结构较稳定，自身发生反应可以相??对消除。电泳结果见图２－３。??ｂｐ??５００??馨＇■＊；．?着：…’＇賓ｉ?’?．??＃?＾?＾?＾?ｊ－＂??图２－３?ＣＨＡ２电泳验证实验??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＣＨＡ２??４０??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]血清外泌体miR-21在肺癌中的表达水平及其诊断效能[J]. 颜晓慧,安泰学,覃思华,徐咏,黄依瑶,张涵. 实用医学杂志. 2017(16)
[2]微小RNA-1246在乳腺癌患者中的临床意义[J]. 王攀,朱杰,顾婉红,李招云. 检验医学. 2017(07)
[3]外泌体在体外对乳腺癌细胞耐药信息传递的作用[J]. 许乘凤,杨振林,花义同,程凯,滕晓飞,张英哲,刘健,王晓红. 西安交通大学学报(医学版). 2017(02)
硕士论文
[1]等温循环放大检测细胞内活性物质[D]. 韩会霞.青岛科技大学 2018
[2]利用催化发夹组装的生物传感器检测目标DNA和人源性α-凝血酶[D]. 白书连.重庆医科大学 2017
[3]乳腺癌及大肠癌循环肿瘤细胞捕获及鉴定方法的建立[D]. 戚丽娜.浙江大学 2017
[4]基于功能化DNA的信号放大与荧光检测新方法研究[D]. 徐楠.南京大学 2015
本文编号：3019397
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?（ａ）透射电子显微镜，（ｂ）?ＮＴＡ和（ｃ）免疫印迹实验分别表征乳腺癌ＭＤＡ－ＭＢ－２３１??细胞和其来源的外泌体??
各组分纯度好，无多余条带；催化发夹组装（ＣＨＡ１）在催发链Ｔ的作用下可发??生无酶反应且条带明显，但发夹结构Ｈ１、发夹结构Ｈ２在没有催发链Ｔ时，两者??也发生反应且条带明显，说明发夹结构不稳定。电泳结果见图２－２。??ｂｐ??５?〇?〇??蠢ｓ袋麗寒＾??图２－２?ＣＩＩＡｌ电泳验证实验??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＣＨＡ１??催化发夹组装（ＣＨＡ２）各组分纯度好，无多余条带；在催发链Ｔ的作用下??可发生无酶反应且条带明显；发夹结构Ｈ１、发夹结构Ｈ２在没有催发链Ｔ时，两??者发生反应不明显（条带不明显），说明发夹结构较稳定，自身发生反应可以相??对消除。电泳结果见图２－３。??ｂｐ??５００??馨＇■＊；．?着：…’＇賓ｉ?’?．??＃?＾?＾?＾?ｊ－＂??图２－３?ＣＨＡ２电泳验证实验??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＣＨＡ２??４０??
各组分纯度好，无多余条带；催化发夹组装（ＣＨＡ１）在催发链Ｔ的作用下可发??生无酶反应且条带明显，但发夹结构Ｈ１、发夹结构Ｈ２在没有催发链Ｔ时，两者??也发生反应且条带明显，说明发夹结构不稳定。电泳结果见图２－２。??ｂｐ??５?〇?〇??蠢ｓ袋麗寒＾??图２－２?ＣＩＩＡｌ电泳验证实验??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＣＨＡ１??催化发夹组装（ＣＨＡ２）各组分纯度好，无多余条带；在催发链Ｔ的作用下??可发生无酶反应且条带明显；发夹结构Ｈ１、发夹结构Ｈ２在没有催发链Ｔ时，两??者发生反应不明显（条带不明显），说明发夹结构较稳定，自身发生反应可以相??对消除。电泳结果见图２－３。??ｂｐ??５００??馨＇■＊；．?着：…’＇賓ｉ?’?．??＃?＾?＾?＾?ｊ－＂??图２－３?ＣＨＡ２电泳验证实验??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＣＨＡ２??４０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]血清外泌体miR-21在肺癌中的表达水平及其诊断效能[J]. 颜晓慧,安泰学,覃思华,徐咏,黄依瑶,张涵. 实用医学杂志. 2017(16)
[2]微小RNA-1246在乳腺癌患者中的临床意义[J]. 王攀,朱杰,顾婉红,李招云. 检验医学. 2017(07)
[3]外泌体在体外对乳腺癌细胞耐药信息传递的作用[J]. 许乘凤,杨振林,花义同,程凯,滕晓飞,张英哲,刘健,王晓红. 西安交通大学学报(医学版). 2017(02)
硕士论文
[1]等温循环放大检测细胞内活性物质[D]. 韩会霞.青岛科技大学 2018
[2]利用催化发夹组装的生物传感器检测目标DNA和人源性α-凝血酶[D]. 白书连.重庆医科大学 2017
[3]乳腺癌及大肠癌循环肿瘤细胞捕获及鉴定方法的建立[D]. 戚丽娜.浙江大学 2017
[4]基于功能化DNA的信号放大与荧光检测新方法研究[D]. 徐楠.南京大学 2015
本文编号：3019397
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