人星状病毒、肠道腺病毒双重实时荧光RT-PCR方法的建立及应用

发布时间：2021-02-14 07:53

　　人星状病毒（Human astrovirus,HAstV）、肠道腺病毒（Enteric adenovirus,EAdV）是引起急性胃肠炎的两种常见病原体,目前尚未实现这两种病原体荧光定量RT-PCR的单管双重检测。为建立一种灵敏特异的双重荧光定量RT-PCR检测方法并应用于实验室样本检测,本研究选择HAstV、EAdV特异性引物和探针,优化反应体系和反应条件,并对该方法的灵敏性、特异性和稳定性进行评价。结果显示,该方法针对HAstV和EAdV的检出限分别可以达到522拷贝/μL和53.5拷贝/μL;与多种常见和罕见的人腹泻病毒没有交叉反应;批内和批间等重复性实验变异系数均小于5%;灵敏度高于常规PCR。本研究提示,建立的HAstV、EAdV双重荧光定量RT-PCR检测方法具有较好的灵敏度、特异性和稳定性,可用于实验室HAstV和EAdV的快速筛查。 

【文章来源】：病毒学报. 2020,36(05)北大核心

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
材料与方法
    1标本来源
    2主要试剂和仪器
    3 Taq Man探针和双向引物
    4常规PCR双向引物
    5病毒核酸提取
    6质粒标准品制备
    7 HAst VRNA标准品的制备
    8 EAd VDNA标准品的制备
    9双重荧光定量RT-PCR反应体系的建立和优化
    10敏感性实验
    11特异性实验
    12稳定性实验
    13方法学一致性评价
    14随机盲样评价
    15临床应用
结果
    1荧光定量RT-PCR反应体系的建立和优化
    2敏感性实验
    3特异性实验
    4稳定性实验
    5临床样本检测方法学一致性评价
    6临床样本检测随机盲样检测
    7临床应用
讨论



本文编号：3033374