纳米微泡搭载siRNA联合超声靶向微泡破碎技术干扰胶质瘤细胞增殖

发布时间：2021-03-19 04:36

　　目的通过薄膜水化法,将脂质体DPPC和DSPE制备成携带有生物素的纳米级微泡。利用生物素——亲和素系统,对纳米级微泡和IDH1-siRNA进行连接,制备纳米微泡-siRNA复合体。超声辐照对纳米微泡-siRNA进行靶向破碎,分别从体内及体外实验,验证siRNA的转染及干扰效率的提高,从而达到抑制肿瘤细胞生长的效果,为肿瘤的基因及药物治疗载体选择提供新思路。方法1.将脂质体DPPC和DSPE-PEG（2000）-biotin溶于2ml氯仿。旋转蒸发后,加入1ml水合液,并于恒温摇床内震荡。500μl脂质体水合液加入密封小管内。将小管内空气置换为惰性气体C₃F₈。银汞调和器内震荡小管45s后,取出管内悬液并用PBS稀释至8ml。同时制备微泡作为对照。利用动态光散射粒度/电位分析仪对制备的纳米及微米气泡进行粒径分析。扫描电镜观测NBs外观。CCK-8检测NBs细胞毒性。2.NBs-siRNA的制备及其检测:利用无RNA酶的PBS将100ul NBs悬液稀释至850ul。加入100ul链霉亲和素水溶液。小管旋转器上震荡小管30min。完成后,添加50... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：89 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

示意图：超声辐照下bubble的改变及其对细胞膜的影响

图 2 NBs-siRNA 复合体示意图，及其在肿瘤组织和正常组织的不同行为。在正常组织中，NBs-siRNA 复合体无法透过血管壁，而在肿瘤组织中，NBs-siRNA 复合体可以透过肿瘤血管壁，进入肿瘤组织间隙。肿瘤靶向超声辐照 NBs 能产生声孔效应，提高 siRNA 的转染效率。

空军军医大学博士学位论文定 NBs 与 siRNA 的连接情况。结果（图 4 D 和 E）显示无论实验组（NBs-FAM-SC复合体）和对照组（单纯 NBs）在光学显微镜下都可以观测到 NBs，为中心透亮而边缘粗黑的圆形或为黑色小点（较小的 NBs），根据标尺可知 bubbles 的大小都在1000nm 以下。而荧光显微镜显示实验组（NBs-FAM-SCR 复合体）可以观测到绿色荧光，而且荧光位置、形态等与 NBs 基本符合，可以判断荧光为 NBs 上所携带，而对照组（单纯 NBs）没有荧光的存在。同时，可以观测到实验组（NBs-FAM-SCR 复合体）荧光图像中有一些不规则荧光，而在光镜下相同位置未观测到 NBs（图 4 红色边框标注区域）。

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]纳米级超声造影剂制备及其初步应用[D]. 蔡文斌.第四军医大学 2015



本文编号：3089144