基于MALDI-TOF MS临床侵袭性丝状真菌的快速鉴定技术研究

发布时间：2021-03-28 06:36

　　目的:评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术在临床常见丝状真菌鉴定中的应用价值。方法:收集2017年4月到2019年2月湖南师范大学附属一医院（湖南省人民医院）各种类型临床标本中分离培养的29株丝状真菌,以及北京协和医院检验科微生物实验室惠赠的26株丝状真菌。对这55株丝状真菌通过传统形态学鉴定、DNA测序及MALDI-TOF MS鉴定方法后,以DNA测序结果为标准,与另外2种方法的鉴定结果进行统计学比较,评价MALDI-TOF MS在临床丝状真菌鉴定上的应用。结果:在28℃和35℃条件下培养的丝状真菌,使用质谱仪鉴定后,经过χ²检验,得出P>0.05,提示培养温度差异无统计学意义;以DNA测序结果为金标准,传统形态学方法的正确鉴定率为69.1%（38/55）,而基于MALDI-TOF MS技术的正确鉴定率可达96.4%（53/55）;本研究中,使用“甲酸乙腈提取法”提取蛋白后,丝状真菌质谱鉴定的正确率为83.6%（46/55）,而“磁珠研磨法”提取蛋白后的质谱鉴定率则为96.4%（53/55）。结论:临床常规工作中使用质谱仪鉴... 

【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

丝状真菌菌落形态及镜下形态图

a 草酸青霉菌落形态 b 草酸青霉镜下形态（10×100）图 1 丝状真菌菌落形态及镜下形态图 DNA 测序.1 扩增产物电泳55 株丝状真菌 DNA 在 2 对引物下进行 PCR 扩增，将其产物进行电泳TS1-F/ITS2-R 扩增产物条带在 500-700bp，具体见图 2；而β-微管蛋白产物条带为 200-600 bp，具体见图 3。

镜下形态（10×100）图 1 丝状真菌菌落形态及镜下形态图3.3 DNA 测序3.3.1 扩增产物电泳55 株丝状真菌 DNA 在 2 对引物下进行 PCR 扩增，将其产物进行电泳，其中 ITS1-F/ITS2-R 扩增产物条带在 500-700bp，具体见图 2；而β-微管蛋白(F/R)扩增产物条带为 200-600 bp，具体见图 3。图 2 丝状真菌基因组 DNA 引物为 ITS1-F/ITS2-R 时 PCR 扩增产物电泳图注：M:DNAmarker；引物为：ITS1-F/ITS2-R；1 烟曲霉；2 黑曲霉；3 黄/米曲霉；4 构巢曲霉；5 土曲霉；6 杂色曲霉；7 溜曲霉；8 镰刀菌；9 普通青霉；10 草酸青霉；11 阴性对照。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3105066