一种区分甲肝病毒天然感染与疫苗免疫的抗体ELISA检测方法的建立
发布时间：2021-03-30 09:07
[目的]甲型肝炎病毒（HAV）是一种具有高度传染性的病原体,引起急性肝病。甲肝病毒感染后可诱导机体产生抗甲型肝炎病毒的结构蛋白和非结构蛋白的抗体。然而,甲型肝炎病毒疫苗的接种导致机体产生主要针对结构蛋白（病毒衣壳）的抗体。而非结构蛋白仅在活病毒活跃复制过程中大量产生,所以在疫苗接种的受试者中针对非结构蛋白的抗体没有或很少产生。目前,商业化免疫检测试剂不能区分人体内甲肝病毒抗体是来自天然感染或是疫苗免疫。在我们开展的甲型肝炎减毒活疫苗和灭活甲型肝炎疫苗的IV期临床试验中,鉴别受试者体内产生的甲肝抗体是来自疫苗免疫或是甲肝病毒天然感染是至关重要的。因此,基于非结构蛋白抗体产生在两种免疫形式中的差异,我们拟建立一种可以区分甲肝病毒天然感染与疫苗免疫的抗体ELISA检测方法。[方法]在我们的研究中,我们将甲型肝炎病毒非结构蛋白的免疫优势表位进行设计、合成、连接并克隆到pGEX-5X-1质粒。并将重组蛋白在大肠杆菌中表达,并经Ni2+磁珠纯化。然后用纯化的重组蛋白作为ELISA抗原,检测血清中HAV非结构蛋白的抗体。本研究构建的ELISA一共检测了来自疫苗Ⅳ其临床研究的77份减毒活疫苗受试者血清...
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．病毒的基因组结构以及结构蛋白的蛋白酶水解过程ＯＲＥＳ：内部核糖体进位位点；ＵＴＲ??非编码区）??
对子代病毒的重吸收和跨膜转运至胆管被认为是肠道分泌病毒的机制。??２．８病毒颗粒结构??甲肝病毒是无包膜的二十立面体结构颗粒，直径约２７ｎｍ［６６］（图２）。成熟的??病毒衣壳由１２个五聚体组成，每个五聚体由５个拷贝数的ＶＰ１，ＶＰ２和ＶＰ３组??成。与其他小ＲＮＡ病毒不同，ＶＰ４并不会出现在成熟的病毒颗粒中。迄今为止，??仍然无法产生高分辨率的甲型肝炎病毒颗粒的图像。２００６年的一篇综述［６７］（图??３）展示了一个通过冷冻电镜技术获得的中等分辨率的图像，显示出在褶皱轴周??围明显凹陷的缺失，这是与其他小ＲＮＡ病毒不一样的地方。然而，这些结果仍??然无法被证实或单独公开发表。甲肝病毒具有非常有点的中和抗原位点。主要的??免疫优势位点是由ＶＰ１和ＶＰ３的残基所组成，是形态依赖的［６８］。第二个位点??是血型糖蛋白Ａ结合位点，甲肝病毒可以利用它与红细胞结合，造成红细胞凝??聚。这个过程在酸性ｐＨ条件下是最优的，而在生理ｐＨ条件下被抑制。表明甲??肝病毒不与红细胞结合而避免被清除［６９
图２．甲肝病毒电镜照片?图３．甲肝病毒中等分辨率冷冻电镜照片??．甲型肝炎病毒流行病学??每年大约有１５０万例甲型肝炎发生在全世界，但感染率可能高达十倍［７１］。??发病率与社会经济水平和安全饮用水密切相关：随着收入的增加和清洁水饮用增加，甲型肝炎病毒感染的发生率降低。甲肝病毒的感染风险与卫生条件、年相关的临床表现以及终身免疫相关决定了全球范围内ＨＡＶ感染的不同模式。肝病毒的地方性流行水平是由人群血清阳性率的结果决定的，世界卫生组（ＷＨＯ）最近发表了关于ＨＡＶ感染全球流行的系统性综述［７２］。甲型肝炎在界范围的流行性可以描述为高、中、低三种流行性。在卫生条件和设备非常差欠发达国家，甲型肝炎病毒感染非常流行，大多数人在儿童时期感染。因为感发生在早期，疾病往往是无症状的，在这些地区的发病的报告病率反而相对较低爆发并不常见。高流行地区包括非洲、亚洲和美国中部和南部，家庭拥挤、卫
【参考文献】：
期刊论文
[1]2014年中国第二类疫苗接种监测数据分析[J]. 袁平,金雅玲,郑景山,曹雷,曹玲生,崔健,肖奇友,王华庆. 中国疫苗和免疫. 2016(02)
[2]Hepatitis A:Epidemiology and prevention in developing countries[J]. Elisabetta Franco,Cristina Meleleo,Laura Serino,Debora Sorbara,Laura Zaratti. World Journal of Hepatology. 2012(03)
[3]Protective effect of inactivated hepatitis A vaccine against the outbreak of hepatitis A in an open rural community[J]. Yue-Gen Shen, Xie-Jun Gu, Jian-Hong Zhou, Xiuzhou District Center for Disease Control and Prevention, Jiaxing 314001, Zhejiang Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2008(17)
本文编号：3109264
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．病毒的基因组结构以及结构蛋白的蛋白酶水解过程ＯＲＥＳ：内部核糖体进位位点；ＵＴＲ??非编码区）??
对子代病毒的重吸收和跨膜转运至胆管被认为是肠道分泌病毒的机制。??２．８病毒颗粒结构??甲肝病毒是无包膜的二十立面体结构颗粒，直径约２７ｎｍ［６６］（图２）。成熟的??病毒衣壳由１２个五聚体组成，每个五聚体由５个拷贝数的ＶＰ１，ＶＰ２和ＶＰ３组??成。与其他小ＲＮＡ病毒不同，ＶＰ４并不会出现在成熟的病毒颗粒中。迄今为止，??仍然无法产生高分辨率的甲型肝炎病毒颗粒的图像。２００６年的一篇综述［６７］（图??３）展示了一个通过冷冻电镜技术获得的中等分辨率的图像，显示出在褶皱轴周??围明显凹陷的缺失，这是与其他小ＲＮＡ病毒不一样的地方。然而，这些结果仍??然无法被证实或单独公开发表。甲肝病毒具有非常有点的中和抗原位点。主要的??免疫优势位点是由ＶＰ１和ＶＰ３的残基所组成，是形态依赖的［６８］。第二个位点??是血型糖蛋白Ａ结合位点，甲肝病毒可以利用它与红细胞结合，造成红细胞凝??聚。这个过程在酸性ｐＨ条件下是最优的，而在生理ｐＨ条件下被抑制。表明甲??肝病毒不与红细胞结合而避免被清除［６９
图２．甲肝病毒电镜照片?图３．甲肝病毒中等分辨率冷冻电镜照片??．甲型肝炎病毒流行病学??每年大约有１５０万例甲型肝炎发生在全世界，但感染率可能高达十倍［７１］。??发病率与社会经济水平和安全饮用水密切相关：随着收入的增加和清洁水饮用增加，甲型肝炎病毒感染的发生率降低。甲肝病毒的感染风险与卫生条件、年相关的临床表现以及终身免疫相关决定了全球范围内ＨＡＶ感染的不同模式。肝病毒的地方性流行水平是由人群血清阳性率的结果决定的，世界卫生组（ＷＨＯ）最近发表了关于ＨＡＶ感染全球流行的系统性综述［７２］。甲型肝炎在界范围的流行性可以描述为高、中、低三种流行性。在卫生条件和设备非常差欠发达国家，甲型肝炎病毒感染非常流行，大多数人在儿童时期感染。因为感发生在早期，疾病往往是无症状的，在这些地区的发病的报告病率反而相对较低爆发并不常见。高流行地区包括非洲、亚洲和美国中部和南部，家庭拥挤、卫
【参考文献】：
期刊论文
[1]2014年中国第二类疫苗接种监测数据分析[J]. 袁平,金雅玲,郑景山,曹雷,曹玲生,崔健,肖奇友,王华庆. 中国疫苗和免疫. 2016(02)
[2]Hepatitis A:Epidemiology and prevention in developing countries[J]. Elisabetta Franco,Cristina Meleleo,Laura Serino,Debora Sorbara,Laura Zaratti. World Journal of Hepatology. 2012(03)
[3]Protective effect of inactivated hepatitis A vaccine against the outbreak of hepatitis A in an open rural community[J]. Yue-Gen Shen, Xie-Jun Gu, Jian-Hong Zhou, Xiuzhou District Center for Disease Control and Prevention, Jiaxing 314001, Zhejiang Province, China. World Journal of Gastroenterology. 2008(17)
本文编号：3109264
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