质粒用于乙型肝炎病毒DNA定量检测室内质量控制的效果评价

发布时间：2017-04-17 12:26

  本文关键词：质粒用于乙型肝炎病毒DNA定量检测室内质量控制的效果评价，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的荧光定量PCR技术特异性强、灵敏度高,已被广泛应用于乙型肝炎病毒(HBV)DNA的定量检测,在HBV诊治及预后判断中有重要的应用价值,而严格的室内质量控制措施是其检测结果准确可信的重要保障。为此,本研究采用基因工程方法,自制了HBV DNA定量PCR检测室内质控品,并对其在临床常规工作中的使用价值进行初步评价。方法选取GeneBank数据库中HBV全基因组序列共65条,涵盖了HBV A-H八个基因型序列。经ClustalX2软件对HBV各个基因型序列进行多序列比对分析后,选择保守序列S区设计引物,扩增得到目的基因片段后将其插入pEASY T1载体构建重组质粒。将重组质粒用血清稀释成107 copies/ml、104copies/ml两个水平室内质控品,初定靶值后用Excel绘制质控图并观察精密度,进行室内质控品的评估。结果HBV S区序列已亚克隆到pEASY T1载体,测序结果与目的片段一致。对序列进行NCBI BLAST特异性分析发现,该序列与GenBank中互补片段的一致率为99%,与已知人和其它病毒的DNA序列无相似性。自制的2个水平质控品的批内精密度(CV)分别为2.16%、2.76%,批间精密度(CV)分别为2.27%、3.19%,重复性、稳定性均符合实验要求。结论利用基因工程技术成功获得了HBV S区重组质粒,制备了HBV DNA2个水平的质控品,精密度和稳定性良好,可用于HBV DNA定量检测的室内质控。
【关键词】：乙型肝炎病毒 荧光定量PCR 室内质控品
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R373.21;R440
【目录】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-8
• 前言8-11
• 第一章 材料与方法11-17
• 1.1 主要试验材料11-12
• 1.1.1 标准株和载体11
• 1.1.2 试验试剂11
• 1.1.3 自配试剂11
• 1.1.4 基质血清11-12
• 1.1.5 试验仪器12
• 1.2 实验方法12-17
• 1.2.1 引物设计与合成12
• 1.2.2 HBV标准株（GBW09150）基因组DNA的提取12-13
• 1.2.3 目的片段的扩增13-14
• 1.2.4 目的DNA的胶回收14
• 1.2.5 重组质粒的构建14-15
• 1.2.6 自制质控品的制备15
• 1.2.7 室内质控的设立15-16
• 1.2.8 评价质控品的重复性16
• 1.2.9 质控品稳定性评价及自制室内质控图16-17
• 第二章 结果17-21
• 2.1 PCR扩增的S区目的片段电泳结果17
• 2.2 重组阳性质粒的测序结果17-19
• 2.3 准确性实验结果19
• 2.4 重复性实验结果19-20
• 2.4.1 批内精密度及室内靶值19
• 2.4.2 批间精密度19-20
• 2.5 稳定性结果及自制室内质控图20-21
• 第三章 讨论21-24
• 第四章 结论24-25
• 参考文献25-28
• 综述28-41
• 参考文献38-41
• 英文缩略词表41-42
• 硕士期间研究成果42-43
• 致谢43

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