梅毒螺旋体鞭毛蛋白B的优势诊断肽段筛选与鉴定

发布时间：2021-04-13 23:13

　　目的:构建、表达、鉴定和纯化梅毒螺旋体（Treponema pallidum,Tp）鞭毛蛋白B（Fla B1,Fla B2,Fla B3）的不同肽段,用间接Ig G ELISA评估各肽段的血清学诊断应用价值,筛选出灵敏度高且特异性强的优势肽段。方法:从Gen Bank中获取Tp的Fla B1、Fla B2和Fla B3的氨基酸序列,用BLAST分析Tp Fla B与其他病原体的鞭毛蛋白的同源性,将3种全长Fla B分为保守的N端、C端及中间可变区M肽段。设计9种Fla B肽段的特异性引物,以相应全长Fla B的重组质粒为DNA模板,PCR扩增各肽段的基因片段,构建p ET28a（+）原核表达载体,经测序鉴定后转化至E.coli BL21（DE3）中,IPTG诱导各重组肽段表达,Western Blot鉴定表达产物,Ni2+-NTA亲和层析柱纯化重组肽段,透析法复性,BCA法测定肽段浓度。建立基于重组Fla B肽段的ELISA,检测各期梅毒患者血清、健康人血清和交叉血清中的特异性Ig G,并将其与TPPA进行比较,初步评价9种肽段的血清学诊断应用价值。结果:成功构建9种Fla B肽段的重... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

种FlaB肽段的PCR扩增产物Fig.4.1PCRamplificationproductsofnineFlaBgenefragments

图 4.1 9 种 FlaB 肽段的 PCR 扩增产物Fig. 4.1 PCR amplification products of nine FlaB gene fragments毒螺旋体 FlaB 肽段重组质粒的构建与鉴定种 FlaB 肽段的菌液 PCR 鉴定结果如下：

FlaB 肽段的诱导表达条件优化 FlaB 肽段有无表达的鉴定aB 肽段重组质粒且处于对数生长期的表达菌液加入 IPTG 同时设立未诱导组，37°C、220 rpm 诱导表达 6 h。SDS-PA诱导组相比，诱导组均有明显表达。

【参考文献】：
期刊论文
[1]卫计委公布2月全国法定传染病疫情概况[J].   上海医药. 2017(05)
[2]2016年10月全国法定传染病疫情概况[J].   内科. 2016(06)
[3]2015年12月全国法定传染病疫情概况[J].   内科. 2016(01)
[4]梅毒特异性抗体试验生物学假阳性分析[J]. 宋焕景,侯生根,陈建春,彭德志.  国际检验医学杂志. 2013(14)
[5]梅毒检测技术进展[J]. 左克.  北方药学. 2012(05)
[6]梅毒螺旋体外膜蛋白Tp0136的制备及在血清学诊断中的应用[J]. 王磊阳,陈政卓,富梦楚,何君梅,李婷婷,沈琳,杨珺.  中国卫生检验杂志. 2011(05)
[7]梅毒螺旋体Tp0821基因的克隆、表达、纯化及免疫活性研究[J]. 伍宁,肖勇健,顾伟鸣,刘双全,赵飞骏,张跃军,吴移谋.  中华皮肤科杂志. 2010 (07)

博士论文
[1]梅毒螺旋体鞭毛蛋白免疫活性分析及其诱导HaCaT细胞表达基质金属蛋白酶的分子机制[D]. 蒋传好.南华大学 2016



本文编号：3136178