脊髓背角线粒体解偶联蛋白4（UCP4）参与小鼠神经病理性痛的机制研究

发布时间：2021-05-09 21:48

　　背景与目的:神经病理性痛是一种以神经系统损伤或功能障碍为原发因素的疼痛,由于其机制不明致使临床缺乏有效的镇痛手段。通过转录组测序和蛋白质谱分析发现,线粒体解偶联蛋白4（Uncoupling20protein4,UCP4）通过介导线粒体可塑性参与脊髓水平慢性痛调控。本实验在神经病理性痛模型（Spared20nerve20injury,SNI）小鼠上,综合运用形态学、行为学以及线粒体功能检测等方法,探讨脊髓背角线粒体UCP4参与神经病理性痛的过程,以期为临床镇痛提供新的策略。方法:1.利用免疫荧光组织化学染色方法,观察小鼠腰段脊髓UCP4的表达分布情况,及其与星形胶质细胞特异性标志物GFAP（Glial20fibrillary20acidic20protein,胶原纤维酸性蛋白）和小胶质细胞特异性标志物Iba1（Ionized20calcium-binding20adapter20molecule201,离子钙接头蛋白抗原）的双标情况。2.利用神经病理性痛SNI小鼠模型建立、动物痛行为学检测、转录组测序、Western-Blot、RT-q20PCR以及线粒体生物学功能检测等方法,观察SNI... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
缩略语表
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英文摘要
前言
文献回顾
第一部分：UCP4在小鼠脊髓的表达分布情况
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要试剂
        1.3 主要液体的配制
        1.4 主要仪器
    2 方法
        2.1 小鼠灌注取材
        2.2 脊髓腰段冰冻切片的制备
        2.3 免疫荧光组织化学染色
        2.4 图像采集和统计分析
    3 结果
        3.1 UCP4在脊髓的表达分布情况
        3.2 脊髓UCP4的表达细胞类型
    4 讨论
第二部分：神经病理性痛模型(SNI)小鼠脊髓背角UCP4的表达变化情况
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要试剂
        1.3 主要液体的配置
        1.4 主要仪器
    2 方法
        2.1 SNI模型制备
        2.2 痛的行为学检测
        2.3 脊髓背角组织及线粒体蛋白提取
        2.4 神经病理性痛模型(SNI)小鼠脊髓背角RNA序列文库构建和测序
        2.5 Western Blot检测
        2.6 RT-qPCR检测
        2.7 线粒体生物学功能检测
        2.8 统计学分析
    3 结果
        3.1 转录组测序验证神经病理性痛模型(SNI)小鼠脊髓背角UCP4的变化
        3.2 神经病理性痛模型(SNI)小鼠机械痛和热痛的行为学变化
        3.3 神经病理性痛模型(SNI)小鼠脊髓背角UCP4蛋白水平的表达变化
        3.4 神经病理性痛模型(SNI)小鼠脊髓背角UCP4mRNA水平的表达变化
        3.5 神经病理性痛模型(SNI)小鼠脊髓背角线粒体生物学功能检测的变化
    4 讨论
第三部分：脊髓水平靶向干预UCP4表达后对小鼠痛行为学的影响
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要药物和试剂
        1.3 主要液体的配置
        1.4 主要仪器
    2 方法
        2.1 UCP4相关病毒的制备
        2.2 UCP4相关病毒脊髓背角浅层定位注射
        2.3 SNI模型制备
        2.4 UCP4病毒干预后小鼠痛行为学检测
        2.5 Western Blot检测
        2.6 RT-qPCR检测
        2.7 线粒体生物学功能检测
        2.8 统计学分析
    3 结果
        3.1 小鼠脊髓背角定位注射感染部位验证
        3.2 UCP4病毒干预后小鼠脊髓背角UCP4mRNA水平的表达变化
        3.3 UCP4病毒干预后小鼠脊髓背角UCP4蛋白水平的表达变化
        3.4 UCP4病毒干预后小鼠脊髓背角线粒体生物学功能的变化
        3.5 UCP4OE病毒能够上调神经病理性痛(SNI)模型小鼠机械痛阈值,UCP4RNAi病毒能够下调正常小鼠的机械痛阈值
    4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]脊髓背角Ⅰ-Ⅲ层疼痛神经环路的研究进展[J]. 王嘉琪,王圣明,严育东,孔牧,罗世城,杨静,戴春秋,杨雁灵,王亚云.  神经解剖学杂志. 2017(04)
[2]线粒体靶向药物的研究进展[J]. 潘凌立,潘达,廖卫兵,柯超,陈安清,郭清莲.  医学综述. 2015(01)
[3]线粒体功能紊乱与慢性痛[J]. 郑晨曦,涂涛,郭保霖,吴亦琳,罗世成,隋秉东,董蜀华,王亚云.  神经解剖学杂志. 2014(01)
[4]线粒体解偶联剂的研究进展[J]. 金甲,张凤,杨玲玲,张杰锋,汤杰,杨帆.  生命科学. 2013(07)
[5]坐骨神经选择性损伤痛模型小鼠脊髓背角线粒体解偶连蛋白UCP4的表达变化[J]. 王雪莹,郭保霖,刘磊,郑晨曦,魏燕燕,隋秉东,李云庆,武胜昔,王亚云.  神经解剖学杂志. 2012(03)
[6]慢病毒载体在RNA干扰中的应用进展[J]. 梁艳,李涛,周克元.  国际检验医学杂志. 2010(11)



本文编号：3178082