几种呼吸道传染病病毒的微流控等温扩增荧光检测技术研究

发布时间：2021-05-16 18:48

　　研究背景:近几年来,频繁暴发的呼吸道传染病疫情严重危害公众健康。2005年暴发的H5N1禽流感,波及17个省市,造成13人死亡。2009年暴发自墨西哥的甲型H1N1流感疫情造成全球恐慌。2013年暴发于中国东部的H7N9禽流感疫情再次引起了全世界的关注。此外,近年来在我国流行的7型、14型和55型腺病毒已造成聚集性暴发疫情。呼吸道传染病现场检测技术的不足,严重影响疫情应急处置的时效性和针对性。目的和意义:快速检测呼吸道传染病病原体是及时发现传染源、采取有效隔离措施,防止疫情蔓延的关键,是呼吸道传染病疫情科学防控的迫切需要。本研究拟建立基于微流控芯片和等温扩增技术的的呼吸道病原体现场快速检测技术,解决当前呼吸道传染病现场检测技术缺乏,难以满足呼吸道症候群主要病原筛查的问题;为及时准确治疗和隔离传染源,实现疫情的及时有效科学防控提供技术支持。研究方法:首先,在GenBank中查找甲型H1、H3、H5、乙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒以及副流感病毒的保守序列,设计其特异性LAMP引物,根据扩增效果筛选出最佳引物,建立并优化常规荧光LAMP体系。其次,设计阵列化微流控芯片,研究等温扩增用酶... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：101 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
个人简历
摘要
ABSTRACT
一、前言
    1 呼吸道传染病概述
        1.1 流感病毒
        1.2 呼吸道合胞病毒
        1.3 副流感病毒
        1.4 腺病毒
    2 常规检测方法
        2.1 病毒的分离培养鉴定
        2.2 免疫学检测方法
        2.3 分子生物学检测方法
    3 环介导等温扩增技术
        3.1 LAMP技术引物
        3.2 LAMP技术原理
        3.3 LAMP技术研究现状
    4 微流控芯片技术
    5 主要研究内容与意义
二、常规等温扩增荧光检测技术的建立及评价
    1 实验材料
        1.1 毒株及分离培养材料
        1.2 核酸提取、荧光定量PCR及LAMP扩增实验材料
        1.3 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 病原体核酸的提取
        2.2 荧光定量PCR方法验证病毒
        2.3 相关病毒质粒扩大及提取实验
        2.4 LAMP引物设计及筛选
        2.5 荧光LAMP反应体系优化
        2.6 特异性评价实验
        2.7 灵敏度评价
    3 结果与讨论
        3.1 病原体荧光定量PCR检测
        3.2 LAMP引物筛选
        3.3 LAMP反应体系优化
        3.4 特异性评价
        3.5 灵敏度评价
    4 小结
三、微流控等温扩增荧光检测技术建立及对呼吸道病毒的检测效果评价
    1 实验材料
        1.1 微流控荧光LAMP实验材料
        1.2 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 微流控等温扩增荧光检测方法的建立及优化
        2.2 微流控等温扩增荧光检测特异性评价实验
        2.3 微流控等温扩增荧光检测灵敏度评价实验
    3 结果与讨论
        3.1 微流控等温扩增荧光检测方法体系优化
        3.2 微流控等温扩增荧光检测方法的特异性
        3.3 微流控等温扩增荧光检测方法的灵敏度
        3.4 与荧光定量PCR方法灵敏度的对比结果
    4 小结
四、结论
参考文献
附录
综述
    参考文献
致谢
攻读学位期间取得的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]成都地区成人急性呼吸道感染病例中副流感病毒检出情况分析[J]. 李兴桥,刘雪薇,周涛,裴晓方.  四川大学学报(医学版). 2017(06)
[2]流感百年:20世纪流感大流行的回顾与启示[J]. 曾祥兴,李康生.  医学与社会. 2010(11)
[3]ELISA技术在禽流感诊断研究中的应用[J]. 韩庆功,崔艳红,张智勇.  生物技术通报. 2008(06)
[4]小鼠抗兔IgG单克隆抗体的制备与应用[J]. 张葵,汪涛,李琦,庄然,宋朝君,李永明,金伯泉.  标记免疫分析与临床. 2008(01)
[5]NASBA——一种新型禽流感病毒检测方法[J]. 刘乐庭,刘爽,封燕芸,陈建国,于常海.  中国生物工程杂志. 2005(11)
[6]LAMP法鉴定奶牛早期胚胎性别的效果研究[J]. 黄金明,熊杰,柳尧波,游伟.  家畜生态学报. 2005(01)
[7]禽流感病毒血凝素分子生物学研究进展[J]. 曹梅,田夫林,庄文忠.  动物医学进展. 2004(02)

硕士论文
[1]全球背景下人源甲型流感病毒传播行为分析[D]. 金梦哲.石家庄铁道大学 2016
[2]禽流感病毒传播过程研究[D]. 李素丽.石家庄铁道大学 2016



本文编号：3190211