线粒体转录因子A对肿瘤细胞辐射敏感性的影响及相关机制研究

发布时间：2021-05-19 13:58

　　线粒体转录因子A（TFAM）是HMG蛋白家族成员,目前已知除了可以调控线粒体DNA（mtDNA）转录活性、参与细胞凋亡外,还作为线粒体损伤模式分子（DAMPs）激活炎症反应和免疫反应。有研究显示,电离辐射通过激活TFAM的表达促进线粒体新生和再分布,保证线粒体生物发生的正常运行。尽管电离辐射可以激活肿瘤细胞的线粒体生物发生,但相应的分子调控机制却未见报道。本研究以TFAM介导的线粒体生物发生为核心,探究TFAM对肿瘤细胞辐射敏感性的影响,以期为优化肿瘤放疗方案提供实验和理论依据。第一部分:线粒体转录因子A的表达对肿瘤细胞辐射敏感性的影响及相关机制研究线粒体是电离辐射的重要靶点,由于线粒体DNA的特殊结构和功能,其更容易受到电离辐射的损伤。TFAM作为线粒体DNA重要的转录和调控因子,能够与线粒体DNA结合,从而调控线粒体生物发生。我们的实验以TFAM介导的线粒体生物发生为核心,揭示电离辐射作用下线粒体生物发生对肿瘤细胞辐射敏感性的调控机制。实验研究发现,电离辐射能够激活TFAM mRNA和蛋白表达。为了进一步探究TFAM对肿瘤细胞辐射敏感性的影响,我们构建了TFAM敲除的稳定细胞系。实... 

【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：102 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
    1.1 线粒体及线粒体生物发生的概述
        1.1.1 线粒体的结构
        1.1.2 线粒体的功能
        1.1.3 调控线粒体生物发生的相关蛋白
        1.1.4 肿瘤的发生发展与线粒体生物发生的关系
    1.2 电离辐射对线粒体生物发生的影响
    1.3 线粒体转录因子A的结构和功能
        1.3.1 线粒体转录因子A的结构
        1.3.2 线粒体转录因子A的功能
    1.4 肿瘤的发生发展与线粒体转录因子A的关系
    1.5 电离辐射对线粒体转录因子A的影响
    1.6 线粒体转录因子A在肿瘤微环境中的作用
    1.7 本研究的背景、意义、内容
        1.7.1 研究的背景和意义
        1.7.2 研究内容
第二章 实验材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 实验材料和试剂
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 溶液配制
    2.2 方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 细胞辐照
        2.2.3 荧光定量PCR
        2.2.4 蛋白质印迹法
        2.2.5 细胞增殖检测
        2.2.6 细胞凋亡检测
        2.2.7 细胞克隆存活检测
        2.2.8 线粒体DNA拷贝数检测
        2.2.9 稳转细胞系的建立
        2.2.10 mRNA和蛋白质稳定性实验
        2.2.11 RNA-蛋白质免疫共沉淀实验
        2.2.12 免疫荧光
        2.2.13 RNA干扰
        2.2.14 核质分离实验
        2.2.15 免疫共沉淀实验
        2.2.16 线粒体抽提
        2.2.17 突变质粒的构建
        2.2.18 统计分析
第三章 线粒体转录因子A对肿瘤细胞辐射敏感性的影响
    3.1 引言
    3.2 实验结果
        3.2.1 电离辐射激活TFAM的表达
        3.2.2 TFAM敲除细胞株的建立
        3.2.3 TFAM对线粒体DNA拷贝数的影响
        3.2.4 TFAM对细胞增殖情况的影响
        3.2.5 TFAM对细胞克隆存活的影响
        3.2.6 TFAM对细胞凋亡的影响
    3.3 讨论
第四章 电离辐射诱导线粒体转录因子A表达的相关机制研究
    4.1 引言
    4.2 实验结果
        4.2.1 电离辐射诱导ATM/p38的活化对TFAM的影响
        4.2.2 RNA结合蛋白HuR对TFAM表达的影响
        4.2.3 HuR对TFAM mRNA稳定性的影响
        4.2.4 p38对TFAM mRNA稳定性的调控
    4.3 讨论
第五章 电离辐射诱导线粒体转录因子A的释放
    5.1 引言
    5.2 实验结果
        5.2.1 电离辐射及DJ-1的缺失对TFAM释放的影响
        5.2.2 TFAM的释放对肿瘤细胞的影响
    5.3 讨论
第六章 DJ-1诱导线粒体转录因子A释放的相关机制研究
    6.1 引言
    6.2. 实验结果
        6.2.1 P53在DJ-IsiRNAs诱导TFAM释放中的作用
        6.2.2 p53介导非转录依赖的细胞凋亡对DJ-1敲低诱导TFAM分泌的影响
        6.2.3 TFAM的乙酰化对TFAM分泌的影响
    6.3 讨论
结论
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]线粒体功能障碍机制及其相关疾病研究进展[J]. 申屠路媚,牟艳玲.  生命科学. 2018(01)
[2]线粒体转录因子A在肿瘤细胞中的作用[J]. 于洋,郭文文.  中国肿瘤. 2016(01)
[3]PGC-1α与肿瘤代谢关系的研究进展[J]. 王旭,沈颖,沈培亮,吴红雁,祝娉婷,陈文星,王爱云,陆茵.  肿瘤. 2015(10)
[4]线粒体转录因子A及其相关疾病[J]. 张纪亮,张宜家,王杰,武芝,张雅,曾淋,马萝燕,陈腾飞,王璐,刘永章,吕斌.  中国细胞生物学学报. 2013(05)
[5]DJ-1抗氧化应激相关机制及其与帕金森发病的关系[J]. 贾娇坤,鲁玲玲,杨慧.  解剖科学进展. 2012(05)
[6]哺乳动物细胞线粒体基因的转录与调控[J]. 刘珊珊,李钰.  细胞生物学杂志. 2009(06)
[7]bcl-2基因的转录调控[J]. 季红斌,翟琦巍,刘新垣,郑仲承.  生物化学与生物物理学报. 2000(02)



本文编号：3195888