阳离子载体介导的铁蛋白基因用于肝细胞癌MRI分子影像的研究

发布时间：2021-05-27 10:12

　　目的:利用安全高效的MRI分子影像技术早期诊断肝细胞癌对降低其死亡率具有重要意义。本研究使用由甲胎蛋白（AFP）启动子启动的铁蛋白基因（Fth）作为MRI报告基因,以阳离子材料作为基因载体,转染肝癌细胞,与正常细胞产生MR对比成像,在分子水平实现肝癌细胞的影像诊断。材料与方法:合成阳离子聚合物PEI-β-CD（PC）作为载体;通过凝胶电泳阻滞、粒径测量及透射电子显微镜等表征实验确定PC与质粒DNA（pDNA）复合的最佳氮磷比（N/P）;通过荧光显微镜及流式细胞术检测转染效率;利用蛋白免疫印迹、免疫荧光及普鲁士蓝染色实验证明由铁蛋白过表达所引起的细胞内铁聚集;通过体外细胞MRI扫描检测对比成像效果。结果:经环糊精（CD）修饰的阳离子聚合物PC在浓度为100μg/ml时细胞存活率接近 95%,与高分子量 PEI（HMW PEI,PEI25kD）及阳离子脂质体 Lipofectamine2000（Lipo）相比毒性明显降低;PC在N/P为50时可紧密复合pDNA,并形成具有适宜理化性质的纳米体系有助其顺利被细胞摄取:粒径143.25±2.49nm,多分散性指数0.211±0.02,Zeta电... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
第1章 绪论
第2章 阳离子载体/质粒DNA的制备及理化性质研究
    2.1 引言
    2.2 试剂与仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 阳离子聚合物的合成与表征
        2.3.2 阳离子载体/pDNA转染体系的制备
        2.3.3 阳离子载体/pDNA转染体系理化性质的表征
        2.3.4 数据分析
    2.4 结果
        2.4.1 阳离子聚合物的合成
        2.4.2 阳离子聚合物的氢谱表征
        2.4.3 质粒及阳离子材料/pDNA的制备
        2.4.4 阳离子载体/pDNA转染体系的表征
    2.5 讨论
    2.6 本章小结
第3章 阳离子载体/质粒DNA的细胞毒性及转染实验研究
    3.1 引言
    3.2 试剂与仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 体外细胞毒性实验
        3.3.2 体外转染绿色荧光蛋白基因
    3.4 结果
        3.4.1 体外细胞毒性实验
        3.4.2 体外细胞转染效率评价
    3.5 讨论
    3.6 本章小结
第4章 阳离子载体/铁蛋白基因用于肝细胞癌的MR分子影像研究
    4.1 引言
    4.2 试剂与仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 铁蛋白和转铁蛋白受体表达检测
        4.3.2 细胞内铁染色
        4.3.3 体外细胞MRI检测
    4.4 结果
        4.4.1 Western Blot法检测铁蛋白的表达
        4.4.2 免疫荧光法检测转铁蛋白受体
        4.4.3 普鲁士蓝检测细胞内铁
        4.4.4 MRI对比成像
    4.5 讨论
    4.6 本章小结
结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读硕士学位期间主要的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]基于钆的纳米对比剂MRI应用进展[J]. 蔡雯雯,王灵杰,岳华杰,张瑞平.  中国医学影像技术. 2017(10)
[2]磁共振钆靶向对比剂的研究现状及展望[J]. 杨晓锋,涂蓉.  国际医学放射学杂志. 2016(05)
[3]肝细胞特异性磁共振对比剂的扫描技术应用[J]. 韩玉娟,杨剑,张翔.  医学影像学杂志. 2014(03)
[4]基于环糊精构建的基因载体进展[J]. 徐妮为,刘梦艳,洪诗斌,颜蔚,付继芳,邓维.  化学进展. 2014(Z1)
[5]肝脏磁共振对比剂的过去、现在和未来[J]. 张水兴,刘于宝,梁长虹.  磁共振成像. 2012(01)
[6]磁共振成像造影剂的研究进展[J]. 肖研,吴亦洁,章文军,李晓晶,裴奉奎.  分析化学. 2011(05)
[7]钆类造影剂用于肿瘤靶向性成像[J]. 沈爱军,董海青,温惠云,徐梦,李永勇,王培军.  化学进展. 2011(04)
[8]新型钆纳米载体在肝靶向分子磁共振显影对比剂中的应用(英文)[J]. 刘永军,陈智金,张娜.  Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences. 2011(02)
[9]转铁蛋白导向脂质体核磁造影剂纳米粒子(TfNIR-LipNBD-Magnevist)——一种肿瘤靶向磁共振造影剂[J]. 王秩秋,单良,王颂平,Alexandru Korotcov,梁兴杰.  生物物理学报. 2008(04)

博士论文
[1]靶向磁共振成像造影剂的合成及其在癌症早期诊断中的应用[D]. 张伟禄.华东师范大学 2011

硕士论文
[1]叶酸靶向纳米复合物的制备及体内外MR成像实验研究[D]. 王中领.苏州大学 2011



本文编号：3207384