乳酸杆菌长效稳定分泌HIV特异性抗体的研究

发布时间：2021-05-31 19:28

　　目的:30年余来,艾滋病（Acquired Immunodeficiency Syndrome,AIDS）在全世界范围内蔓延,已成为危害人类健康的重大传染病之一。虽然高效联合抗病毒治疗（Highly Active Anti-Retroviral Therapy,HAART）已被广泛应用于HIV感染的治疗,但HAART治疗需要每日服药,给患者带了一定的精神和经济负担,另外HAART带来的潜在耐药风险,及药物的不良反应也影响抗病毒治疗药物的应用,而且由于病毒储存库的存在,即使长期服药最好的抗病毒药物也不能清除HIV,不达到治愈的目的,因此有效的抗HIV疫苗仍是有望根治HIV的关键。迄今为止,虽然有多项HIV疫苗项目已推进到临床实验阶段,但均没有取得可喜的结果,在长期HIV疫苗研究过程中,研究者们分离出许多高效广谱的抗HIV中和抗体,多项基于这些抗体或抗体衍生物的被动免疫策略在HIV预防和治疗上具有一定的效果。虽然相比于抗病毒药物,抗体发挥抗病毒作用时效较长,不需要日日给药,但仍需要多次给予抗体,才能在体内达到维持数周的有效抗病毒浓度。因此如何保证体内,尤其是感染部位（黏膜）长期存在足够的有... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：72 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1.双抗性筛选的乳酸杆菌表达质粒构建策略

中国医科大学博士学位论文（2）酶切：10X 缓冲液 1.1 5ul，内切酶 ApaI 1ul，胶回收后 PCR 产plp0373_AmyA（Em/Amp） 1ug，加水补充到总体积 50ul。25℃酶切 1 小钟后，加入 1ul NdeI,37℃酶切 1 小时 30 分钟，电泳鉴定，胶回收 DNA 片试剂盒说明书）。（3）T4 连接：目的片段和骨架质粒摩尔比为 50fmol/10fmol,T4 连接酶（1U5X 缓冲液 4ul，其余用无酶水补充。16℃过夜连接。（4）质粒转化：同上（2.3.2）

杆菌表达质粒的改造。A.从 pUC19 载体扩增出的子的序列长度为 1039bp，第一/二泳道均为氨苄青泳 marker。B.改造后质粒与原质粒经双酶切后电泳经 SalI 和 EcoRI 双酶切后出现的 6.8kb 和 1.3kb 两性质粒经 SalI 和 EcoRI 双酶切后出现的 5.7kb 和 为未经酶切的双抗性质粒和单抗性质粒。第三泳道霉素单抗性质粒。D.改造后的氨苄青霉素和红霉启动子和同源信号肽的乳酸杆菌表达质粒外源蛋白信号肽 lp0373 是 WCFS1 菌株同源的信号的启动子 PsppA 替换为 WCFS1 菌株同源的启动因构建了含有 WCFS1 菌株同源启动子 pLDHL，PCR 扩增质粒中的 pLdhl 片段（图 4.A），片

【参考文献】：
期刊论文
[1]不同质粒电转三种乳酸菌的比较研究[J]. 王巧惠,王光强,宋馨,夏永军,曹利瑞,艾连中.  工业微生物. 2016(01)



本文编号：3208837