Hsa-miR-21-5p在LPS刺激的HK-2细胞中的动态表达变化、作用及其机制的初步探索

发布时间：2021-06-08 11:41

　　研究背景:脓毒症是由感染引起的全身炎症反应综合征,临床上可发展为严重脓毒症、脓毒症休克和多器官障碍综合征,死亡率高,是ICU患者死亡的主要原因之一。严重脓毒症发生时,可出现多个器官的功能损伤,形成多器官功能障碍,其中肾脏的损伤较为常见,发展成为急性肾损伤,脓毒症诱导的急性肾损伤大约占了ICU中急性肾损伤的50%。miRNAs是一类非编码小分子RNA,其通过特异性识别靶基因mRNA来抑制蛋白翻译或诱导mRNA的降解,从而在转录后水平调控基因的表达。miRNA-21参与多个细胞进程,如:癌细胞的增长和侵袭,心肌缺血性损伤,上皮细胞间质转化,缺血性肾损伤等。然在脓毒症急性肾损伤方面的研究报道却比较少,故本研究试探索miRNA-21与脓毒症急性肾损伤的关系。研究目的:1.探讨脂多糖刺激的人肾皮质近曲小管上皮细胞在不同时间点miR-21及炎症因子的表达;2.探讨被上调的miR-21在LPS刺激的人肾皮质近曲小管上皮细胞炎症反应中所发挥的作用;3.初步探索被上调的miR-21在LPS刺激的人肾皮质近曲小管上皮细胞炎症反应中发挥作用的机制。研究方法:1.构建HK-2细胞（人肾皮质近曲小管上皮细胞）的... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２：?ＬＰＳ（１０ｕｇ／ｍｌ）刺激ＨＫ－２细胞４、８、１２小时后ｍｉＲ－２１的相对表达水平（ＲＴ－ｑＰＣＲ检??测细胞ｍＲＮＡ）??

蛋白的表达水平均上升，与ＬＰＳ（?１０ｕｇ／ｍｌ）刺激ＨＫ－２细胞后各时间点ＩＬ－６?ｍＲＮＡ??的测量结果一致，说明用ＨＫ－２细胞建立ＬＰＳ诱导的脓毒症急性肾损伤模型成??功。见图３。??外‘’：、顧ｉｒ?＾■＊??＊?；?＾Ｋｍｍｍ?ｍｍｍｍ?＇＇ｍａｒｎｍ＾??■§?４??＾?１?＊＊?＊Ｓ＊ｆ＊?★??ｔ２－?Ｍ?＂?１??ｊｉｌ＿Ｎ＿?＿??２?ｃｏｎｔｒｏｌ?１０ｕｇ－４ｈ?１０ｕｇ－８ｈ?１０ｕｇ－１２ｈ?１０ｕｇ－２４ｈ??图３：?ＬＰＳ（１０ｕｇ／ｍｌ）刺激ＨＫ－２细胞４、８、１２小时后ＩＬ－６蛋白的相对表达水平。Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ??分析条带，上图为ＩＬ－６蛋白，下图为内参ＧＡＰＤＨ蛋白。（蛋白上样量依次为对照组，４、８、??１２、２４小时组）??Ｆｉｇｕｒｅ?３：?Ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ＩＬ－６?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｉｎ?ＨＫ－２?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ?ｗｉｔｈ?ＬＰＳ?（１０??ｕｇ?／?ｍｌ）?ｆｏｒ?４，?８?ａｎｄ?１２?ｈｏｕｒｓ．?Ｔｈｅ?ｂａｎｄ?ｏｆ?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?ａｎａｌｙｓｉｓ－ｔｈｅ?ｕｐｐｅｒ?ｐａｎｅｌ?ｆｏｒ?ｔｈｅ?ＩＬ－６??ｐｒｏｔｅｉｎ，?ｔｈｅ?ｐｉｃｔｕｒｅ?ｂｅｌｏｗ?ｉｓ?ｔｈｅ?ＧＡＰＤＨ?ｐｒｏｔｅｉｎ?．（ｐｒｏｔｅｉｎ?ｌｏａｄｉｎｇ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｆｏｌｌｏｗｅｄ?ｂｙ?ｔｈｅ??２４??

?为１）而言，为１７．０７±１．４０，?ｐ值为０．００３，小于０．０１，差异有统计学意义。说明??转染成功，以此转染条件转染ＨＫ－２细胞后，ｍｉＲ－２１的表达量明显升高。见图４。??￡?２〇ｉ?★★??〇??邕１５－??０）??Ｓ?１０－??ａ：??Ｅ??？?５＿?？靜??２?〇Ｌｎ＾?，???ｍｉＲ－２１?ＮＣ?ｍｉＲ－２１?ｍｉｍｉｃｓ??图４：转染效率：分别转染ｍｉＲ－２１?ｍｉｍｉｃｓ（５０?ｎＭ）及其阴性对照物（５０?ｎＭ）?（ｍｉＲ－２１?ＮＣ组）２４ｈ??后，ＲＴ－ｑＰＣＲ检测细胞ｍｉＲ－２１的相对表达水平??Ｆｉｇｕｒｅ?４：?Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ：?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ｍｉＲ－２１?ａｆｔｅｒ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ｗｉｔｈ??ｍｉＲ－２１?ｍｉｍｉｃｓ?（５０?ｎＭ）?ａｎｄ?ｉｔｓ?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?（５０?ｎＭ）?（ｍｉＲ－２１?ＮＣ）?ｆｏｒ?２４?ｈ．??注：与转染ｍｉＲ－２１?ＮＣ组（设为１）相比，＊＊表示Ｐ＜０．〇１。??２？上调ｍｉＲ－２１对ＬＰＳ诱导ＨＫ－２细胞产生ＩＬ－６?ｍＲＮＡ的影响??转染组ＩＬ－６的表达相对于对照组（设为１）而言，为０．６８士０．０７?（Ｐ＝０．０１７），Ｐ＜０．０５，??差异具有统计学意义。这表明过表达ｍｉＲ－２１能下调ＬＰＳ诱导ＨＫ－２细胞ＩＬ－６的??表达，ｍｉＲ－２１在其中发挥着抗炎症的作用。见图５??３７??


本文编号：3218371