结核分枝杆菌耐利奈唑胺相关基因突变的研究

发布时间：2021-06-13 19:22

　　目的:了解结核分枝杆菌耐利奈唑胺相关基因在肺结核临床分离株突变的情况,为今后耐多药结核病的治疗提供参考。方法:收集未曾使用过利奈唑胺的肺结核患者痰标本,进行结核菌培养及药物敏感试验,获得206例相应的敏感及耐药菌株,使用CTAB法提取结核分枝杆菌DNA,PCR技术扩增rplD、23S rRNA及rplC目的基因,进行测序,通过与H37Rv标准菌株进行对比,获得相关基因的突变信息。结果:206例临床分离株中,敏感菌株106株,单耐药菌株24株,多耐药菌株14株,耐利福平菌株8株,耐多药菌株50株,广泛耐药菌株4株。206例临床分离株经扩增与测序分析,发现21例出现rplD基因突变,其中20例为G236A突变,1例为同义C381T突变。1例在23S rRNA基因中出现C344T突变。结论:在未使用利奈唑胺前,在多例临床分离株中检测到了rplD及23S rRNA基因突变,其中rplD基因突变频率为9.7%,23S rRNA基因突变频率为0.5%,未检测到rplC基因突变,提示rplD基因G236A突变与利奈唑胺天然突变有一定关系。 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ND-1000检测结核分枝杆菌DNA浓度

.5 μL I 型 Gold view 后摇晃使之分布均匀，放进干燥的钉齿插入溶液中，静置半小时后水平取出制孔器。骤中制好琼脂糖凝胶缓慢置于充满 0.5×TBE 的电泳槽情况在凝胶上样孔中加入 2 μL PCR 产物或者 2.5 μL 150 v，等标本出孔后调整电压至 130 v 电泳 1 h。凝胶放置于凝胶成像仪内，通过成像仪显像后留取照片梯度聚合酶链式反应（PCR）确定最适退火温度度聚合酶链式反应扩增 rplD 基因引物计算出的解链温度（TM 值）调整聚合酶链式反应 50 ℃，上限设置为 60 ℃，聚合酶链式反应扩增 rplD

查看凝胶电泳图（图3），在 3000 bp 左右位置可见明亮的目的条带，在 1000 bp 以内可见一非目的条带产物，且随着温度增加逐渐消失，可见聚合酶链式反应温度为 59.6 ℃的孔处的非目

【参考文献】：
期刊论文
[1]利奈唑胺联合方案治疗耐多药结核病效果及不良反应研究[J]. 付道芳,梁宗安.  传染病信息. 2019(01)
[2]利奈唑胺与抗结核药物联用对患者重症结核性脑膜炎的疗效及其对脑脊液CRP、NSE水平改善的影响[J]. 刘家斌,杨云珠,罗叶婷.  抗感染药学. 2018(11)
[3]利奈唑胺治疗耐多药肺结核临床疗效观察及药学分析[J]. 王方.  中国现代医药杂志. 2018(09)
[4]四联抗结核药物联合利奈唑胺、莫西沙星对难治性结核性脑膜炎患者CSF细胞学、NSE和NGF及其受体的影响[J]. 胡清亮,张绿浪.  海南医学院学报. 2018(15)
[5]利奈唑胺联合治疗非结核分枝杆菌肺病的近期疗效与安全性分析[J]. 张权武.  临床医学研究与实践. 2018(02)
[6]广泛耐药结核分枝杆菌对利奈唑胺的耐药情况分析[J]. 宗兆婧,荆玮,霍凤敏,尚媛媛,梁倩,李云絮,逄宇,黄海荣.  新发传染病电子杂志. 2017(03)
[7]体外诱导获取对利奈唑胺耐药的结核分枝杆菌菌株及其稳定性研究[J]. 胡明豪,王彬,付雷,徐建,陆宇.  中国防痨杂志. 2017 (04)
[8]耐药结核病的流行趋势[J]. 李拯民,王甦民.  中华结核和呼吸杂志. 2000(02)



本文编号：3228170