基于链置换扩增和DNA酶的HIV相关基因荧光传感检测新方法研究
发布时间：2021-07-14 10:57
人类免疫缺陷病毒（HIV）可通过破坏感染者的免疫系统而导致获得性免疫缺陷综合症（AIDS）。免疫学检测方法如酶联免疫吸附分析（ELISA）和蛋白质印迹（WB）是用于HIV感染临床诊断的常用方法。然而,由于HIV感染后机体需要一段时间才能产生相应的抗体,因此HIV感染的免疫学检测存在“窗口期”,使HIV感染的早期诊断受到了挑战。核酸检测方法因其即使在没有HIV抗体存在的情况下也能提示病毒感染而受到广泛关注。因此,灵敏和特异地检测HIV相关基因对于HIV感染患者的早期准确诊断和治疗至关重要。链置换扩增（SDA）是一种高效的等温核酸扩增策略。此外,DNA酶因其具有循环剪切特性也可以用作信号放大单元。在本研究中,基于链置换扩增和镁离子依赖的DNA酶,构建了一种新型的荧光传感方法,用于快速检测HIV相关基因。当检测体系中存在靶DNA时,靶DNA可以与模板DNA链杂交并激活链置换扩增以产生大量DNA酶序列片段。随着镁离子的引入,DNA酶被激活从而循环剪切标有荧光基团和猝灭基团的底物链,使荧光基团和猝灭基团分离而荧光得以恢复。在最佳实验条件下,所构建的传感方法可实现对靶DNA在线性范围100 fM-...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
基于链置换和DNA酶反应的荧光传感器检测HIVDNA原理图
3 实验参数的优化：（A）Klenow 片段浓度的优化（B）Nb.BbvCI 浓度的优化（C）底物浓度的优化（D）总反应时间的优化Fig. 3 Optimizations of experimental parameters: (A) evaluation of the effect of Klenowgment polymerase concentration, (B) evaluation of the effect of concentration of Nb.BbvCI,) evaluation of the effect of substrate concentration, (D) evaluation of the effect of the totalaction time. When one parameter changed, the others were under their optimal conditions.he error bars represented the standard deviations in three different measurements for eachconcentration4 荧光传感方法的性能分析在最佳的实验条件下，对所构建的荧光方法的线性范围和灵敏度进行了评估。图 4A 所示，荧光强度随着靶 DNA 浓度的增加而逐渐上升。在 100 fM 至 1 nM靶 DNA 浓度范围内，校准曲线显示荧光强度（F）（518 nm）与靶 DNA 浓度（C）对数之间呈现良好的线性关系（图 4B）。得到的线性方程为 F=17.4847 lg C（pM）
图 4 通过不同浓度的 HIV DNA 检测进行动态范围和灵敏度分析：靶 HIV DNA 浓度分别为（a）1 nM;（b）100 pM;（c）10 pM;（d）1 pM;（e）100 fM;（f）0 pM。（A）500-600nm 区域的荧光发射光谱。（B）荧光信号峰（518 nm 处）与靶 DNA 浓度对数的关系Fig. 4 Dynamic range and sensitivity investigation by detecting HIV DNA at variousconcentrations: (a) 1 nM; (b) 100 pM; (c) 10 pM; (d) 1 pM; (e) 100 fM; (f) 0 pM. (A)Fluorescence emission spectra in a region of 500-600 nm. (B) Relationship of fluorescencesignal peak (at 518 nm) with logarithm of target DNA表 2 比较不同的 HIV 相关基因检测平台Table 2 Comparison of different platforms for HIV-related DNA detectionPlatform StrategyaLimit Linear range ReferenceFluorescence T7 exonuclease 9.1 pM 50 pM-8 nM [37]Fluorescence MB and Ag NCs 4.4 nM 10 nM-200 nM [38]
本文编号：3284006
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
基于链置换和DNA酶反应的荧光传感器检测HIVDNA原理图
3 实验参数的优化：（A）Klenow 片段浓度的优化（B）Nb.BbvCI 浓度的优化（C）底物浓度的优化（D）总反应时间的优化Fig. 3 Optimizations of experimental parameters: (A) evaluation of the effect of Klenowgment polymerase concentration, (B) evaluation of the effect of concentration of Nb.BbvCI,) evaluation of the effect of substrate concentration, (D) evaluation of the effect of the totalaction time. When one parameter changed, the others were under their optimal conditions.he error bars represented the standard deviations in three different measurements for eachconcentration4 荧光传感方法的性能分析在最佳的实验条件下，对所构建的荧光方法的线性范围和灵敏度进行了评估。图 4A 所示，荧光强度随着靶 DNA 浓度的增加而逐渐上升。在 100 fM 至 1 nM靶 DNA 浓度范围内，校准曲线显示荧光强度（F）（518 nm）与靶 DNA 浓度（C）对数之间呈现良好的线性关系（图 4B）。得到的线性方程为 F=17.4847 lg C（pM）
图 4 通过不同浓度的 HIV DNA 检测进行动态范围和灵敏度分析：靶 HIV DNA 浓度分别为（a）1 nM;（b）100 pM;（c）10 pM;（d）1 pM;（e）100 fM;（f）0 pM。（A）500-600nm 区域的荧光发射光谱。（B）荧光信号峰（518 nm 处）与靶 DNA 浓度对数的关系Fig. 4 Dynamic range and sensitivity investigation by detecting HIV DNA at variousconcentrations: (a) 1 nM; (b) 100 pM; (c) 10 pM; (d) 1 pM; (e) 100 fM; (f) 0 pM. (A)Fluorescence emission spectra in a region of 500-600 nm. (B) Relationship of fluorescencesignal peak (at 518 nm) with logarithm of target DNA表 2 比较不同的 HIV 相关基因检测平台Table 2 Comparison of different platforms for HIV-related DNA detectionPlatform StrategyaLimit Linear range ReferenceFluorescence T7 exonuclease 9.1 pM 50 pM-8 nM [37]Fluorescence MB and Ag NCs 4.4 nM 10 nM-200 nM [38]
本文编号：3284006
本文链接：https://www.wllwen.com/linchuangyixuelunwen/3284006.html
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