两种新型酶联免疫分析法检测乙肝表面抗原和克罗诺杆菌

发布时间：2021-07-28 03:40

　　酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assays,ELISA）是将抗原抗体的特异性识别和酶对底物的高效催化作用相结合的一种非均相高通量免疫分析技术。传统ELISA方法一般基于辣根过氧化物酶（Horseradish peroxidase,HRP）催化底物四甲基联苯胺产生比色信号定量检测目标物,其灵敏度较低且不利于裸眼检测。近年来基于一些新型信号如荧光、等离子共振、电化学、化学发光等的高灵敏ELISA方法备受关注,在环境监测、临床诊断和食品安全等领域中发挥着重要的作用。本研究以乙肝表面抗原（HBsAg）和克罗诺杆菌（Cronobacter）为检测对象,分别建立了基于新型信号输出的荧光淬灭ELISA和等离子共振ELISA（Plasmonic ELISA,pELISA）方法,实现了对目标物的高灵敏检测。巯基丙酸修饰的CdTe量子点（MPA-QDs）对H₂O₂极度敏感,微量H₂O₂即可使其荧光信号大大降低。因此,本研究以葡萄糖氧化酶作为酶标记物催化底物葡萄糖产H_2... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

基于GOx介导MPA-QDs荧光淬灭ELISA检测HBsAg原理图（后附彩图）

运用本实验检测结果与医院使用商业化时间分辨荧光试剂盒检测结果作比对，以商业化试剂盒检测结果为横坐标，本实验检测结果为纵坐标绘制曲线，作相关性分析。2.3 结果与分析2.3.1 GOx 介导的 MPA-QDs 荧光淬灭表征MPA 修饰的 CdTe QDs 采用硼氢化钠还原法合成[81]。在本研究中 MPA-QDs作为信号输出材料，可以发出亮黄色荧光，通过紫外-可见吸收光谱和荧光发射光谱对其进行表征，MPA-QDs 在紫外光区域有较强吸收，在可见光区 568 nm 处有特征吸收峰，最大荧光发射波长为 590 nm（图 2.2A）。图 2.2B 显示量子点平均粒径在 4 nm 左右且具有很好的单分散性。在长达 12 个月的监测过程中发现，在 4℃环境保存 MPA-QDs，显示其具有良好的荧光稳定性。

第二章 基于 CdTe 量子点荧光淬灭 ELISA 高灵敏检测乙肝表面抗原下来，破坏了 QDs 的稳定性，导致 QDs 发生聚集，荧光淬灭。因此本研究采用PBS（0.01 M，pH 7.4）作为信号输出体系的缓冲溶液。MPA-QDs 对 H2O2的敏感度实验结果如图 2.3B 所示。QDs 的淬灭率随 H2O2浓度的增加而增加，当 H2O2浓度介于 0.0975 ~ 6.25 μM 之间，与荧光淬灭率有很好的线性关系（R2= 0.9819），且淬灭率为 10%时的 H2O2浓度为 0.402 μM，表明 MPA-QDs 的荧光对 H2O2的浓度极为敏感。在 H2O2存在的条件下，MPA 和 CdTe 量子点之间的 Cd-S 键很容易被氧化形成有机二硫产物 RS-SR，导致较多的 MPA 从 QDs 表面脱落，使得 QDs的荧光发生淬灭[84]。

【参考文献】：
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本文编号：3307135