铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性及相关耐药基因研究

发布时间：2021-08-10 20:39

　　目的通过检测临床分离的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）氨基糖苷类修饰酶基因及16SrRNA甲基化酶基因的表达情况,研究氨基糖苷类修饰酶及16SrRNA甲基化酶与PA耐药的相关性,为指导临床合理化用药及抗菌药物研发提供依据和帮助。方法（1）选择安徽医科大学第一附属医院2013年11月-2015年12月期间的临床标本,经分离纯培养后,采用法国梅里埃公司VETEC 2 COMPACT全自动微生物分析仪鉴定和药敏检测,药敏判断标准按CLSI 2015年版标准规定的临界值判定耐药、中介和敏感,并对9种临床常用代表性抗菌药物的耐药情况进行分析,筛选氨基糖苷类耐药的铜绿假单胞菌菌株。（2）采用聚合酶链式反应对氨基糖苷类修饰酶基因和16SrRNA甲基化酶基因扩增,并进行序列测定及分析。氨基糖苷类修饰酶基型包括aac（3）-I,aac（3）-II,aac（6’）-I,aac（6’）-II,ant（2’’）-I和ant（3’’）-I共6种,16SrRNA甲基化酶基因型包括armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD,应用2%琼脂糖凝胶电泳技术分析扩增产物,与阳性对照分... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

rmtB基因电泳图谱

3.2.2 阳性基因测序将 PCR 扩增电泳结果中含有 rmtB 基因的阳性产物进行基因测序，PCR 阳性产物为 PCR 直接全自动荧光法测序，委托上海华津公司纯化并进行 DNA 测序，测序在美国 ABI 公司 3730 型毛细管全自动测序仪上进行。3.2.3 序列比对结果 测序后通过 BLAST 程序进行分析，序列与美国核酸库（GenBank）已登录的 rmtB 序列 100%同源，其在 GenBank 中的序列号为FJ483516.1，PCR 产物部分测序图见图 2 和图 3。

图 3 rmtB 基因反向测序图Fig 3 reverse sequencing of gene rmtB（part）3.3 氨基糖苷类修饰酶基因检测结果3.3.1 氨基糖苷类修饰酶电泳结果PCR 扩增产物经 2%琼脂糖凝胶电泳，出现与阳性对照分子相当的目的条带为阳性。 实验结果显示：在 33 株氨基糖苷类耐药的铜绿假单胞菌中，有 28 株产氨基糖苷类修饰酶，基因 aac(3)-II 共 15 株，aac(6')-I 共 9 株，aac(6')-II 共 15 株、ant(2'')-I 共 24 株 、ant(3'')-I 共 11 株，未扩增出 aac(3)-I 基因，阳性基因检出率依次为 ant(2'')-I(32.43%)、aac(3)-II(20.27%)、aac(6')-II(20.27%)、ant(3'')-I（14.86%），aac(6')-I（12.16%），本研究中检出率最高的基因型是 ant(2'')-I，有 5 株细菌未检出氨基糖苷类修饰酶基因；27 株对氨基糖苷类抗生素中介及敏感的铜绿假单胞菌


本文编号：3334744